Suvremeni problemi znanosti i obrazovanja. Napredak moderne prirodne znanosti Kako računati analizu peritonealne tekućine

1

Proteomski profil peritonealne tekućine u vanjskoj genitalnoj endometriozi proučavan je pomoću dvodimenzionalne elektroforeze i masene spektrometrije tijekom leta. Otkriveni su proteini razlika koji se pojavljuju kod vanjske genitalne endometrioze: apolipoprotein A-IV, globulin koji veže spolne hormone, komponente komplementarnog sustava C3 i C4b. Proteini koji su odsutni u vanjskoj genitalnoj endometriozi uključuju faktor diferencijacije pigmentnog epitela, transtiretin, haptoglobin, α-1-antitripsin i inhibitor apoptoze 6. Moguća uloga identificiranih proteina u razvoju glavnih poremećaja u endometriozi je raspravljali. Otkrivene razlike proteina mogu se koristiti kao biljezi ove bolesti.

vanjska genitalna endometrioza

peritonealna tekućina

proteomska analiza

razlike u proteinima

1. Adamyan, L.V. Endometrioza: vodič za liječnike / L.V. Adamyan, V.I. Kulakov, E.N. Andreeva // M.: Medicine, 2006. - 416 str.

2. Govorun, V.M. Proteomske tehnologije u suvremenoj biomedicinskoj znanosti / V.M. Govorun, A.I. Archakov // Biokemija. - 2002.– broj 10.– S.1341–1359.

3. Dedul, M.I. Sustav proteolize u krvnom serumu i peritonealnoj tekućini tijekom kirurškog liječenja bolesnika s endometriozom / M.I. Dedul, L.E. Radetskaya, L.N. Brick // Vijesti o kirurgiji. - 2006. - broj 3. - str.74-80.

4. Ishchenko, A.I. Endometrioza: dijagnoza i liječenje / A.I. Ishchenko, E.A. Kudrina // M.: GEOTAR-MED, 2002. - 104 str.

5. Linde, V.A. Proteomske tehnologije u proučavanju endometrioze / V.A. Linde, L.R. Tomai, V.O. Gun'ko i sur. // Med. vestn. Južno od Rusije. - 2013. - broj 4. - str.12-16.

6. Minkevič, N.I. PEDF-neinhibitorni serpin s neuroprotektivnim i antiangiogenim djelovanjem / N.I. Minkevič, V.M. Lipkin, I. A. Kostanian // ActaNaturae. - 2010. - broj 3. - str.74-84.

7. Bedaiwy, M.A. Okoliš peritonealne tekućine u endometriozi. Kliničkopatološke implikacije / M.A. Bedaiwy, T. Falcone // Minerva Ginecol. –2003. - V.55, N 4. - P.333-345.

8. Bernard, K.R. Metode u funkcionalnoj proteomici: dvodimenzionalna elektroforeza u poliakrilamidnom gelu s imobiliziranim gradijentima pH, probava u gelu i identifikacija proteina masenom spektrometrijom / K.R. Bernard, K.R. Jonscher, K.A. Resing, N. G. Ahn, Methods Mol. Biol. - 2004. –V. 250. - P. 263-282.

9. Hammond, G.L. Različite uloge globulina koji veže spolni hormon u reprodukciji / G.L. Hammond // Biol. Reprod. - 2011. - V. 85, N 3. - P.431-441.

10. Kabut, J. Razine komponenata komplementa iC3b, C3c, C4 i SC5b-9 u peritonealnoj tekućini i serumu neplodnih žena s endometriozom / J. Kabut, Z. Kondera-Anasz, J. Sikora i sur. // Fertil. Steril. –2007. - V.88, N 5. - P.1298-1303.

11. Richardson S.J. Stanična i molekularna biologija transtiretina i hormona štitnjače / S.J. Richardson // Int. Vlč. Citol. - 2007. - V. 258. - P.137-193.

12. Sarrias M.R. Uloga ljudske Sp alfe kao receptora za prepoznavanje uzoraka / M.R. Sarrias, S. Roselló, F. Sánchez-Barbero i sur. // J. Biol. Chem. - 2005. - V. 280, N 42. - P. 35391-35398.

13. Spaulding H.L. Apo A-IV: novost o regulaciji i fiziološkim funkcijama / H.L. Spaulding, E. Delvin, M. Lambert i sur. // Biochim. Biophys. Acta. - 2003. - V. 1631, broj 2. - P. 177-187.

14. Wassell J. Haptoglobin: funkcija i polimorfizam / J. Wassell // Clin. Laboratorija. –2000. - V. 46, N 11-12. - P.547-552.

Značaj proučavanja vanjske genitalne endometrioze (EGE) povezan je s velikom učestalošću širenja ove patologije među ženama u reproduktivnoj dobi i njenim značajnim utjecajem na njihovo reproduktivno zdravlje i životni standard. Trenutno je prikazana važna uloga peritonealne tekućine (RV) u patogenezi endometrioze, budući da upravo se u njemu događa razvoj i rast endometrioidnih žarišta. Proučavanje sastava proteina gušterače pomoću proteomskih tehnologija usmjerenih na proučavanje skupa bjelančevina eksprimiranih genomom stvara kvalitativno nove mogućnosti za produbljivanje razumijevanja molekularnih mehanizama razvoja endometrioze, njezinog predviđanja i rane dijagnoze.

svrha rada... Proučavati proteomski spektar gušterače žena sa i bez IGE.

Materijal i metode istraživanja

Istraživanje je obuhvatilo 20 bolesnika reproduktivne dobi (prosječna dob 29,3 ± 0,3 godine), od čega 10 bolesnika s EGE s III-IV stadijima bolesti prema r-AFS klasifikaciji (glavna skupina) i 10 bez endometrioze (kontrolna skupina) . Materijal za istraživanje bila je gušterača dobivena iz stražnjeg prostora maternice tijekom laparoskopije. Proteomska analiza gušterače provedena je pomoću dvodimenzionalne elektroforeze u poliakrilamidnom gelu (Protein IEFCell i ProteanIIxiMulti-Cell uređaji, Bio-Rad, SAD), nakon čega je slijedilo bojanje proteina ionima srebra. Identifikacija proteina nakon njihove tripsinolize provedena je MALDI masenom spektrometrijom vremena prolaska na masnom spektrometru Autoflex II (Bruker, Njemačka) pomoću programa MascotMSSearch (MatrixScience, SAD) i NCBI i Swiss-Prot baza podataka. identifikacije proteina uzeti su kao pouzdani na razini značajnosti ne manje od 95%, a stopa pokrivenosti nižim od 60%.

Značaj razlika u proteomskom spektru gušterače žena u kontrolnoj i glavnim skupinama utvrđen je pomoću c2 testa (verzija softvera Statistica 6.0. Iz StatSoft. Jnc.). Rezultati su procijenjeni kao statistički značajni na str<0,05.

Rezultati istraživanja i njihova rasprava

Kao rezultat provedene proteomske analize gušterače, otkriven je niz razlika proteina, čija se prisutnost ili odsutnost javlja samo tijekom IGE (vidi tablicu, sl.). Tako je u gušterači žena u glavnoj skupini utvrđena pojava sljedećih proteina: apolipoprotein A-IV, globulin koji veže spolni hormon (SHBG), komponente komplementa C3 i C4b, koje nisu pronađene u bolesnika kontrolne skupine. skupina.

stol 1

Identificirani proteini gušterače u žena u kontrolnoj i ispitivanoj skupini

	Ime proteina
	α-1-antitripsin
	Čimbenik diferencijacije pigmentnog epitela
	Komponenta sustava komplementa C3
	Apolipoprotein A-IV
	Haptoglobin
	Globulin koji veže spolne hormone
	Inhibitor apoptoze 6
	Komponenta sustava komplementa C4-b
	Transtiretin

Napomena: pI - izoelektrična točka, Mm - molekularna težina, "+" - prisutnost proteina, "-" - odsutnost proteina, p - značaj razlika među skupinama.

I B

Lik: 1. Proteomske mape peritonealne tekućine žena u kontrolnoj (A) i glavnoj (B) skupini

Bilješka. Numeriranje proteina odgovara onome u tablici

Povećanje proizvodnje (i, kao posljedica toga, pojava u gušterači) apolipoproteina A-IV, koji ima antioksidativna i protuupalna svojstva, očito ima kompenzacijsku vrijednost u uvjetima oksidacijskog stresa i upale koji prate razvoj ovog patologija.

Povećani sadržaj SHBG u endometriozi, koji regulira bioraspoloživost steroidnih hormona za stanice endometrija, stvara uvjete za lokalnu hiperestrogenizam. U tim uvjetima postaje moguće pojačati proliferativni potencijal endometrioidnih heterotopijskih stanica.

Povećana sekrecija peritonealnih makrofaga komponenata sustava komplementa C3 i C4b, koje su uključene u upalni odgovor, neutralizaciju apoptotičnih stanica i imunoloških kompleksa, daje određeni doprinos mehanizmima razvoja endometrioze i neplodnosti povezane s endometriozom.

Uz ova odstupanja u IGE, u proteomskom spektru gušterače nedostaje 5 proteina: faktor diferencijacije pigmentnog epitela, transtiretin, inhibitor apoptoze 6, haptoglobin i α-1-antitripsin.

Faktor diferencijacije pigmentnog epitela jedan je od najmoćnijih antiangiogenih i antiproliferativnih čimbenika; stoga inhibicija njegove ekspresije može biti jedan od razloga koji dovodi do smanjenja apoptoze endometrija i povećanja angiogeneze, promičući implantaciju i rast heterotopije.

Odsutnost u gušterači žena glavne skupine transtiretina, koja transportira T3 i T4, očito stvara lokalni višak hormona štitnjače, čiji toksični učinak dovodi do oštećenja reproduktivnih organa. Hormoni štitnjače, modulirajući učinke estrogena na staničnoj razini, mogu pridonijeti razvoju poremećaja histo- i organogeneze hormonski osjetljivih struktura i pogoršanju tijeka endometrioze.

Među proteinima koji nisu otkriveni u IGE, važnu ulogu u regulaciji imunološkog odgovora ima inhibitor apoptoze 6 koji luče makrofagi. Moguće je da upravo kršenje ekspresije ovog proteina dovodi do stvaranja neravnoteže imunokompetentnih stanica u gušterači (zbog suzbijanja apoptoze T limfocita i NK stanica).

Može se smatrati da odsutnost neenzimatskog antioksidansa haptoglobina u gušterači doprinosi pojačavanju oksidativnog stresa koji se razvija u endometriozi.

Uz ovu patologiju, α-1-antitripsin, inhibitor serinskih proteaza, koje su izravno uključene u invaziju stanica endometrija, također nije pronađen u gušterači, što očito uzrokuje neravnotežu u sustavu proteaza-inhibitor, što olakšava implantacija stanica endometrija.

Provedene studije pokazuju da se razvoj endometrioze događa u pozadini promjena u proizvodnji niza važnih bjelančevina uključenih u regulaciju djelovanja hormona, angiogenezu, apoptozu, redoks procese, upalu i imunološki odgovor.

nalazi

1. Modifikacija proteomskog spektra gušterače važan je patogenetski čimbenik u razvoju IGE.

2. Proteini kojih nema ili se pojavljuju u gušterači u endometriozi mogu poslužiti kao informativni biljezi ove bolesti.

Recenzenti:

Avrutskaya VV, doktor medicinskih znanosti, vodeći istraživač akušerskog i ginekološkog odjela, voditelj ambulantnog odjela Savezne državne proračunske institucije "RNIIAP" Ministarstva zdravstva Rusije. Savezna državna proračunska institucija "Rostovski istraživački institut za opstetricju i pedijatriju" Ministarstva zdravstva Rusije, Rostov na Donu;

Kaushanskaya LV, dr. Med., Dr. Sc., Glavni istraživač Opskrbnog i ginekološkog odjela Federalne državne proračunske institucije "RNIIAP" Ministarstva zdravstva Rusije. Savezna državna proračunska institucija "Rostovski istraživački institut za porodništvo i pedijatriju" Ministarstva zdravstva Rusije, Rostov na Donu.

Bibliografska referenca

Tomai L.R., Linde V.A., Ermolova N.V., Gunko V.O., Pogorelova T.N. ULOGA PROTEMSKE NEUSMJERENOSTI PERITONEALNE TEČNOSTI U PATOGENEZI VANJSKE GENITALNE ENDOMETRIJOZE // Suvremeni problemi znanosti i obrazovanja. - 2014. - br. 6.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id\u003d17171 (datum pristupa: 01.02.2020). Skrećemo vam pažnju časopisima koje je izdala "Akademija prirodnih znanosti"

Do nakupljanja slobodne tekućine u trbušnoj šupljini dolazi uslijed upalne reakcije, poremećenog protoka limfe i cirkulacije krvi iz različitih razloga. Ovo se stanje naziva ascites (kapljica), a njegova pojava može dovesti do razvoja ozbiljnih posljedica za ljudsko zdravlje.

Tekućina nakupljena u peritoneumu idealno je stanište za patogenu mikrofloru, koja je uzročnik peritonitisa, hepatorenalnog sindroma, pupčane kile, jetrene encefalopatije i drugih jednako opasnih patologija.

Za dijagnozu ascitesa koristi se jedna od najsigurnijih i neinvazivnih, ali vrlo preciznih metoda - studija koja koristi ultrazvučne valove. Otkrivanje prisutnosti tekućine u trbušnoj šupljini ultrazvukom provodi se prema uputama liječnika na temelju postojećih kliničkih znakova patološkog procesa.

Trbušna šupljina je anatomski odvojena zona koja neprestano oslobađa vlagu radi poboljšanja klizanja visceralnih listova peritoneuma. Obično se ovaj izljev može dinamički apsorbirati i ne akumulirati na njemu prikladnim područjima. U našem članku želimo pružiti informacije o uzrocima abnormalnog rezerviranja tekućine, dijagnozi patološkog stanja ultrazvukom i učinkovitim metodama njegovog liječenja.

Zašto se slobodna tekućina nakuplja u trbušnoj šupljini?

Ascites se razvija uslijed različitih vrsta patoloških procesa u zdjeličnim organima. U početku nakupljeni transudat nema upalnu prirodu, njegova količina može se kretati od 30 ml do 10-12 litara. Najčešći uzroci njegovog razvoja su oslabljeno lučenje bjelančevina, koje osiguravaju nepropusnost tkiva i putova koji provode limfu i krv u cirkulaciji.

Ovo stanje može izazvati urođene anomalije ili razvoj u tijelu:

• ciroza jetre;
• kronično zatajenje srca ili bubrega;
• portalna hipertenzija;
• proteinsko gladovanje;
• limfostaza;
• tuberkulozne ili maligne lezije peritoneuma;
• šećerna bolest;
• sistemski eritematozni lupus.

Često se vodena kapljica razvija stvaranjem tumora sličnih tvorbi u mliječnim žlijezdama, jajnicima, probavnim organima, seroznim membranama pleure i peritoneuma. Osim toga, slobodna tekućina može se akumulirati u pozadini komplikacija u postoperativnom razdoblju, pseudomiksoma peritoneuma (nakupljanje sluzi koja se vremenom podvrgava reorganizaciji), amiloidna distrofija (kršenje metabolizma proteina), hipotireoza koma (miksedem).

Mehanizam nastanka kapljice je procurivanje tekućine iz trbušne šupljine iz glavnih limfnih kanala, krvnih žila i tkiva organa

Znakovi ascitesa

U ranim fazama razvoja ovog stanja pacijenti nemaju pritužbi, nakupljanje slobodne tekućine može se otkriti samo ultrazvukom. Vidljivi simptomi pojavljuju se kada količina transudata pređe jednu i pol litru, osoba osjeća:

• povećanje trbušnog trbuha i tjelesne težine;
• pogoršanje opće dobrobiti;
• osjećaj sitosti u trbušnoj šupljini;
• oticanje donjih udova i tkiva skrotuma (kod muškaraca);
• podrigivanje;
• žgaravica;
• mučnina;
• teškoće u disanju;
• nadutost;
• tahikardija;
• izbočenje pupčanog čvora;
• nelagoda i bol u trbuhu;
• poremećaji stolice i mokraće.

Kada se velika količina izljeva nakupi u peritoneumu, osoba može čuti karakteristično prskanje tekućine i osjetiti val.

Ako je ultrazvučni pregled trbušne šupljine pokazao da ima viška vlage, liječnik koji je prisutan mora točno utvrditi osnovni uzrok patološkog stanja. Ispumpavanje nakupljenog transudata nije učinkovita metoda liječenja ascitesa.

Priprema za ultrazvučni pregled i tijek njegovog provođenja

Ova studija nema nikakve kontraindikacije ili ograničenja, u hitnim slučajevima provodi se bez prethodne pripreme pacijenta. Planirani postupak zahtijeva poboljšanu vizualizaciju patoloških promjena u organima. Pacijentu se savjetuje da iz prehrane izuzme hranu koja sadrži veliku količinu vlakana i povećava proizvodnju plina 3 dana prije studije.

Uoči studije popijte laksativ ili napravite klistir za čišćenje. Da biste smanjili nakupljanje plinova u crijevima na dan ultrazvučnog pregleda, morate uzeti Mezim ili aktivni ugljen. Suvremene metode ultrazvučne dijagnostike omogućuju utvrđivanje najvjerojatnijih područja nakupljanja slobodne tekućine u trbušnoj šupljini.

Zbog toga kvalificirani stručnjaci ispituju sljedeća anatomska područja:

• Gornji "pod" peritoneuma, koji se nalazi ispod dijafragme. Od posebne su dijagnostičke vrijednosti prostori smješteni ispod jetre i formirani od glavnog dijela tankog crijeva - uzlaznog i silaznog dijela debelog crijeva. Uobičajeno, takozvani bočni kanali ne postoje - pokrov peritoneuma čvrsto je povezan s crijevima.
• Mala zdjelica, u kojoj se razvojem patoloških procesa može akumulirati izljev koji teče iz bočnih kanala.

Fizičke karakteristike vlage nakupljene u peritoneumu iz bilo kojeg razloga ne dopuštaju odraz ultrazvučnog vala, ovaj fenomen čini dijagnostički postupak što informativnijim. Prisutnost izljeva u ispitivanim anatomskim prostorima stvara mračni fokus na monitoru aparata. U nedostatku slobodne tekućine, dijagnoza traje ne više od 5 minuta.

Da bi se otkrila suvišna vlaga, ultrazvučna sonda pomiče se duž prednje i srednje aksilarne linije s obje strane pacijentovog tijela niz trbuh

Ako se transudat ne može otkriti, neizravni znakovi mogu ukazivati \u200b\u200bna njegovu prisutnost:

• pomicanje petlji debelog crijeva;
• promjena zvuka tijekom udaranja (tapkanje) - bubnjić u gornjem peritoneumu, tup u donjem.

Vrste trbušne vodenice ultrazvukom

Međunarodna klasifikacija bolesti ne razlikuje ascites kao zasebnu bolest - ovo je stanje komplikacija posljednjih faza drugih patoloških procesa. Prema svjetlini kliničkih simptoma razlikuju se sljedeći oblici ascitesa:

• početno - količina vode nakupljene unutar trbuha doseže 1,5 litre;
• s umjerenom količinom tekućine - očituje se oticanjem nogu, primjetnim povećanjem prsa, otežanim disanjem, žgaravicom, zatvorom, osjećajem težine u trbuhu;
• masivan (volumen izljeva veći je od pet litara) - opasno stanje koje karakterizira napetost zidova trbušne šupljine, razvoj insuficijencije funkcije srčanog i dišnog sustava, infekcija transudata.

U bakteriološkoj procjeni kakvoće slobodne tekućine koja se proizvodi u posebnim laboratorijskim uvjetima razlikuje se sterilna (odsutnost patogenih mikroorganizama) i zaražena (prisutnost patogenih mikroba) kapi.

Prema dijagnostičkim prognozama, postoji ascites, koji je podložan terapiji lijekovima, i stabilno patološko stanje (njegovo ponavljanje ili nepodložnost liječenju).

Što se radi nakon potvrde patologije ultrazvukom?

Tijek liječenja ovisi o tome koja je bolest uzrokovala nakupljanje viška vlage u peritoneumu. Da bi precizno dijagnosticirali patološki proces, stručnjaci koji provode provode sveobuhvatan pregled pacijenta, uključujući:

• biokemijske i opće kliničke analize krvi i mokraće;
• istraživanje onkoloških biljega i pokazatelja metabolizma elektrolita;
• anketna radiografija šupljina prsnog koša i trbuha;
• koagulogram - procjena parametara koagulacijskog sustava;
• angiografija krvnih žila, koja omogućuje procjenu njihovog stanja;
• MRI ili CT trbuha;
• hepatoscintigrafija - moderna tehnika za ispitivanje jetre pomoću gama kamere, koja omogućuje vizualizaciju organa;
• dijagnostička laparoskopija s medicinskim ubodom ascitne tekućine.

Za ispumpavanje transudata iz trbušne šupljine koristi se metoda terapijske laparocenteze - u prednjem zidu trbuha radi se proboj kroz koji se uklanja višak tekućine

Pacijentima s cirozom jetre preporuča se intrahepatično portosistemsko ranžiranje čija se tehnika sastoji u postavljanju metalnog mrežnog stenta radi stvaranja umjetne veze između ovratnika i jetrenih vena. Ako je bolest teška, neophodna je transplantacija organa.

Na kraju gornjih podataka, želio bih još jednom naglasiti da se nakupljanje slobodne tekućine u trbušnoj šupljini smatra nepovoljnom manifestacijom kompliciranog tijeka osnovne bolesti. Razvoj ascitesa može izazvati kršenje funkcionalne aktivnosti srca i slezene, unutarnja krvarenja, peritonitis, cerebralni edem.

Stopa smrtnosti bolesnika s masivnom trbušnom vodenicom doseže 50%. Mjere koje sprečavaju pojavu ovog patološkog stanja sastoje se u pravodobnom liječenju zaraznih i upalnih procesa, pravilnoj prehrani, odbijanju pijenja alkohola, umjerenim sportovima, preventivnim pregledima od strane medicinskih stručnjaka i točnoj provedbi njihovih preporuka.

1

Relevantnost. Svaka kirurška trauma na peritoneumu faktor je stresa, a adhezija je jedna od najčešćih komplikacija. Citološke promjene u peritonealnoj tekućini imaju određeni utjecaj na ovaj proces, čija će studija omogućiti predlaganje novih pristupa njegovoj kontroli ne samo tijekom planiranih operacija, već i u ekstremnim uvjetima.

Svrha studije. Istražiti citološke promjene u peritonealnoj tekućini u dinamici operativnog stresa.

Materijal i metode. U istraživanju je sudjelovalo 60 štakora u dobi od 3 mjeseca, dosegnuvši masu od 250-300 g, kojima je nanesena standardna kirurška trauma. Proučavanje staničnog sastava peritonealne tekućine u procesu adheziogeneze provedeno je na pokusnim životinjama. Da bi se to učinilo, unutar 5 dana prije primjene operativne ozljede i svaki drugi dan tijekom 30 dana u postoperativnom razdoblju uzeta je peritonealna tekućina s naknadnim citološkim pregledom. Pri uzimanju peritonealne tekućine, životinja je prethodno bila fiksirana u razvijenom i patentiranom uređaju (RF patent br. 72405, registriran 20. travnja 2008.). Prikupljanje peritonealne tekućine obuhvaćalo je sljedeće faze: laparolifting prednjeg trbušnog zida pomoću elemenata predloženog uređaja, uzimanje uzoraka peritonealne tekućine pomoću razvijenog uređaja za punkciju trbušne šupljine (RF patent br. 89954, registriran 02.12.09.) ). Materijal za citološko ispitivanje centrifugiran je, supernatant je uklonjen i od dobivene suspenzije napravljeni su razmazi. Razmazi su obojeni metodom Romanovsky-Giemsa i podvrgnuti citološkoj analizi svjetlosnom mikroskopijom.

Stupanj adhezije proučavan je na 90 štakora. U tri (po 30 životinja) prethodno opisanih skupina razina adhezija izračunata je u dinamici kirurške traume 10., 20. i 30. dana (posljednje razdoblje karakteriziralo je vrijeme konačnog formiranja peritonealnih adhezija). U tu svrhu, nakon relaparotomije, revidirana je trbušna šupljina i određen je morfološki tip svake otkrivene adhezije.

Izračun razine ljepljivog postupka izveden je u apsolutnim brojevima pomoću prethodno razvijene i patentirane matematičke formule. Rezultati su obrađeni standardnim statističkim metodama.

Rezultati. Citološkim ispitivanjem peritonealne tekućine u pripremljenim nalazima svih eksperimentalnih skupina otkriveni su sljedeći stanični elementi: eritrociti, limfociti, leukociti, eozinofili, segmentirani leukociti, monociti, mezotel; rjeđi su bili makrofagi i stanice slične fibroblastima. Citološka slika peritonealne tekućine imala je jasan odnos s volumenom kirurške traume i funkcionalnim poremećajima peritoneuma.

Stanični sastav peritonealne tekućine u skupini sa standardnom kirurškom traumom karakterizirale su sljedeće promjene: broj eritrocita obnovljen je do 10. dana nakon kirurške traume. Leukociti su se smanjili u roku od 3-5 dana nakon operacije uspostavljanjem prosječne normalne razine leukocita za 9 dana; stanice monocitno-makrofagnog niza povećale su se tek 8-10. dana; u prvih 5-7 dana nakon operacije zabilježen je relativno mali porast broja limfocita.

Desetog dana nakon primjene standardne kirurške ozljede, izračunati USP iznosio je 0,31 ± 0,01 cm3, s povećanjem trajanja USP-a težio je rasti, dostižući 0,34 ± 0,02 cm3 do 20. dana i do 30 dana. - 0,36 ± 0,01 cm3.

Nalazi. Stanični sastav peritonealne tekućine izravno ovisi o volumenu kirurške ozljede, dok stabilnost kvalitete staničnog sastava peritonealne tekućine prati promjena njegove količine u dinamici regenerativnog odgovora peritoneuma . Obnavljanje početnog karaktera citološke komponente peritonealne tekućine za 15-23 dana ne osigurava stabilizaciju adheziogeneze, koja traje do 30 dana.

Bibliografska referenca

Mendalieva A.S. CITOLOŠKE KARAKTERISTIKE PERITONEALNE TEČNOSTI U DINAMICI OPERATIVNOG STRESA // Napredak moderne prirodne znanosti. - 2011. - broj 8. - S. 121-122;
URL: http://natural-sciences.ru/ru/article/view?id\u003d27712 (datum pristupa: 01.02.2020). Skrećemo vam pozornost časopisima koje je izdala "Akademija prirodnih znanosti"

UDK 579.842.23+ 616-092.19

T.P. Starovoitova, T.A. Ivanova, G.B. Mukhturgin, S.A. Vityazeva, V.I. Dubrovin,

K.M. Korytov, S.V. Balahonov

PROMJENE STANIČNOG SASTAVA PERITONEALNE TEČNOSTI U BIJELIH MIŠOVA TIJEKOM INFEKCIJSKOG PROCESA IZAZVANOG YERSINIA PESTISOM SA RAZLIČITIM PLASMIDNIM SASTAVOM

Irkutsk znanstveno-istraživački institut protiv kuge Sibira i Dalekog istoka (Irkutsk)

Članak predstavlja podatke o utjecaju plazmidnog sastava mikroba kuge na suppopulacijski sastav mononuklearnih stanica peritonealne tekućine bijelih miševa u ranim fazama zaraznog procesa. Pokazano je da promjene u staničnom sastavu peritonealne tekućine u pokusnih životinja ovise o plazmidnom profilu sojeva mikroba kuge. Tijekom eksperimenta također je otkrivena fazna promjena u kvantitativnom sastavu mastocita peritonealne tekućine bijelih miševa zaraženih sojevima Yersinia pestis s različitim spektrom plazmida. Ključne riječi: Yersinia pestis, peritonealna tekućina, virulencija

PROMJENE U STANIČNIM KOMPONENTAMA PERITONEALNE TEČNOSTI BIJELIH MIŠOVA SA INFEKCIJOM POVODOM YERSINIA PESTISA SA RAZLIČITIM PROFILOM PLASMIDA

T.P. Starovoytova, T.A. Ivanova, G.B. Mukhturgin, S.A. Vityazeva, V.I. Dubrovina,

K.M. Korytov, S.V. Balahonov

Irkutsk Institut za istraživanje kuge Sibira i Dalekog Istoka, Irkutsk

U članku su predstavljeni podaci o utjecaju profila plazmida Yersinia pestis na strukturu subpopulacije mononuklearnih stanica peritonealne tekućine miševa u ranim fazama zaraznog procesa. Pokazano je da promjena staničnog sastava peritonealne tekućine pokusnih životinja ovisi o plazmidnom profilu sojeva Yersinia pestis. Određen je fazni karakter u promjenama kvantitativnog sastava mastocita peritonealne tekućine bijelih miševa zaraženih sojevima Y. pestis s različitim spektrom plazmida. Ključne riječi: Yersinia pestis, peritonealna tekućina, virulencija

Ogromna većina čimbenika virulencije Yersinia pestis povezana je sa sastavom plazmida. Genom uzročnika kuge glavne podvrste - Yersinia pestis subspecies pestis - ima tri plazmida - pYU (45MDa), pYP (6MN) i pYT (61MDa), njihova uloga je dobro proučena u provođenju patogenih svojstava Yersinia . Uz prisustvo pYV plazmida, sojevi Yersinia pokazuju mnoga fenotipska obilježja: adhezija stanica, autoaglutinacija, površinska aglutinacija, kao i sinteza proteina vanjske membrane, uključujući V- i W-antigene i druge proteine, čije je djelovanje usmjereno na suzbijanje fagocitna aktivnost imunoloških stanica. Plazmidi pYP i pYT specifični su za vrstu. Plazmid rYP određuje sintezu bakteriocina pesticina 1 i aktivatora plazminogena, dok plazmid rYT kodira dva najistraženija čimbenika virulencije - mišji toksin i F1 kapsule. Karakteristična značajka patogena koji cirkulira u tuvinskom žarištu je prisutnost u njegovom genomu dodatnog četvrtog plazmida pTRZZ s još uvijek nejasnim funkcijama. Pretpostavlja se da je ovaj plazmid genetski modificirana verzija rezidentnog plazmida od 9,5 kD koji nosi pla (aktivator plazminogena) i pstl (pesticin 1). Gubitak plazmida dovodi do promjene biokemijskih i kulturnih svojstava, kao i do smanjenja ili potpunog gubitka virulencije patogena.

Vodeći klinički znak infekcije i opijenosti kugom, koji određuje težinu tečaja

a ishod bolesti je kršenje homeostaze makroorganizma. Primarni ciljevi endotoksina su polimorfonuklearni leukociti, makrofagi, monociti, endotelne stanice i drugi stanični elementi. Promjene u staničnom sastavu peritonealne tekućine mogu se smatrati dijagnostičkim kriterijem ozbiljnosti bolesti kod mnogih bolesti, uključujući kugu. S tim u vezi, procjena kvantitativnog i kvalitativnog staničnog sastava peritonealne tekućine kod bijelih miševa tijekom zaraznog procesa izazvanog Y. pestis s različitim sastavom plazmida je od velikog interesa.

Svrha rada: istražiti dinamiku promjena u subpopulacijskom sastavu mononuklearnih stanica peritonealne tekućine bijelih miševa u ranim fazama eksperimentalne infekcije kugom.

MATERIJALI I METODE

Eksperimentalni model u pokusima bio je 175 pasmine, ali standardni u smislu uvjeta i težine (18-20 g) bijelih miševa oba spola. Životinje su izvađene iz pokusa u skladu s "Pravilima laboratorijske prakse u Ruskoj Federaciji" odobrenim Naredbom Ministarstva zdravstva Ruske Federacije br. 267 od 19. lipnja 2003 i Nacionalnim standardom Ruska Federacija GOST R 53434-2009 "Načela dobre laboratorijske prakse".

Šest sojeva Y. pestis subsp. pestis i Y. pestis subsp. altaica iz kolekcije Ir-

stol 1

Karakteristike ispitivanih sojeva mikroba kuge

Soj Mjesto izolacije Sastav plazmida Virulencija za bijele miševe (Obo), m.

Y. pestis subsp. pestis I-2638 Tuvan prirodni fokus kuge pYP + pYV + pTP33 + pYT + 10 / vrlo virulentan

Y. pestis subsp. pestis I-3479 Irkutsk Institut za zaštitu od kuge pYP + pYV-pTP33 + pYT + avirulent

Y. pestis subsp. pestis I-3480 Irkutsk Institut za zaštitu od kuge pYP-pYV-pTP33 + pYT + avirulent

Y. pestis subsp. altaica I-2359 Gorno-Altajski prirodni fokus kuge pYP + pYV + pYT + 4 x 104 / blago virulentan

Y. pestis subsp. altaica I-2948 Gorno-Altajski prirodni žarište kuge pYP-pYV + pYT + 3 x 108 / rezidualna virulencija

Y. pestis subsp. altaica I-2948/3 Irkutsk Institut za zaštitu od kuge pYP-pYV-pYT + avirulent

kutsk istraživački institut protiv kuge Rospotrebnadzora (tablica 1).

Intaktni bijeli miševi podijeljeni su u 6 eksperimentalnih i 1 kontrolnu skupinu od po 25 životinja. Životinje pokusnih skupina zaražene su Y. pestis u koncentraciji od 1 x 106 mc u volumenu od 0,5 ml intraperitonealnom metodom. Pokusnim životinjama skupine I ubrizgana je dvodnevna kultura Y. pestis subsp. pestis I-2638, skupina II - Y. pestis subsp. pestis I-3479, skupina III - Y. pestis subsp. pestis I-3480, eksperimentalna skupina IV životinja zaražena je referentnim gorno-altajskim sojem Y pestis subsp. altaica I-2359, skupina V - Y. pestis subsp. altaica I-2948, skupina VI - selekcijskim sojem Y. pestis subsp. altaica I-2948/3.

Uzorkovanje materijala od pokusnih životinja (peritonealna tekućina) provedeno je nakon 30, 60, 90, 120 i 180 minuta. Ukupan broj nuklearnih stanica u 1 ml peritonealne tekućine izbrojan je u fiksnim pripravcima obojenim standardnim metodama. Za bakteriološku analizu, krv iz srca i peritonealne tekućine (po 0,1 ml) inokulirana je na čvrsti hranjivi medij (Hottingerov agar, pH 7,2).

Koristili smo metode anketne mikroskopije. Kvantitativna procjena ukupnog broja leukocita provedena je jedinstvenom metodom brojanja stanica u komori Goryaev. Postotak različitih vrsta leukocita proveden je metodom morfološkog ispitivanja peritonealne tekućine u razmazima. U proučavanju pripravaka pomoću računalnog programa "MoticImagesPlus" (verzija 2), provedeno je diferencijalno brojanje bazofila tkiva (TC), izmjeren je njihov promjer i površina. Stupanj aktivacije MC procijenjen je indeksom degranulacije stanica (IDTC) - postotni omjer degranuliranih pretilih bazofila i njihovog ukupnog broja.

Automatska analiza slike izvedena je pomoću svjetlosnog mikroskopa "Zeiss" (Njemačka) s video kamerom "Moticam 2000", rezolucije 1392 x 1040 piksela, približno. 10, sv. jedna stotina.

Značaj rezultata istraživanja dobiven je matematičkim metodama statističke obrade korištenjem komparativne analize Studentovim t-testom i korištenjem računalnog programa Statistica, verzija 6.0 (StatSoft Inc. 19842001, IPCHI 31415926535897) i softverskog paketa

Microsoft Office Excel (2003). Rezultati su smatrani značajnima u odnosu na kontrolu na str< 0,05.

REZULTATI I RASPRAVA

Ukupan broj stanica u peritonealnoj tekućini kod netaknutih životinja iznosi 4,3 ± 0,9 x 103 na 1 cm3, dok su makrofagi prevladavajući tip stanica i čine 60,5 ± 5,6% ukupnog broja stanica, a limfociti 17,0 ± 2,8 %; 5,5 ± 0,8% su mezotelne stanice i drugi stanični elementi.

U zaraženih bijelih miševa uočava se fazičnost u promjeni ukupnog broja nuklearnih stanica. U životinja zaraženih virulentnom Y. pestis subsp. pestis I-2638, nakon 30 minuta ukupan broj nuklearnih stanica naglo se povećava na 1,5 ± 0,4 x 104 po cm3, što premašuje indekse netaknutih životinja za 3,4 puta. Do 60 minuta studije pokazatelji se smanjuju na netaknute vrijednosti, nastavljajući smanjivati \u200b\u200bu sljedećim razdobljima. Citološka slika peritonealne tekućine ima jasan odnos s kulturom zaraze. U životinja iz skupine I, 30 minuta nakon infekcije, zabilježen je porast broja limfocita, koji je premašio vrijednost kod netaknutih životinja za 4 puta zbog naglog smanjenja broja monocita. Te su se promjene otkrivale u svim razdobljima promatranja. U peritonealnoj tekućini bijelih miševa zaraženih Y. pestis subsp. pestis I-2638, nakon 120 minuta od početka eksperimenta, zabilježen je porast broja segmentiranih neutrofila za 2,5 puta, u usporedbi s kontrolom (p< 0,05), и незначительное увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов. На последнем сроке исследования в мазках перитонеальной жидкости выявляется большое количество фибробластов, агрегация лимфоцитов и большое количество делящихся клеток.

U bijelih miševa zaraženih Y. pestis subsp. altaica I-2359, Y. pestis subsp. pestis I-3479 i Y. pestis subsp. altaica I-2948/3, nije bilo statistički značajnih promjena 30 minuta nakon početka eksperimenta. Za 180 minuta broj nuklearnih stanica u peritonealnom eksudatu premašuje kontrolne vrijednosti za 2,8 (str< 0,01), 1,9 (р < 0,05) и 1,5 раза соответственно. При введении животным Y. pestis subsp. pestis И-3480 и Y. pestis subsp. altaica И-2948 через 30 мин отмечается повышение общего числа ядерных клеток с последующим снижением (120 мин) до уровня контроля, и к 180 мин показатель вновь увеличивается.

Prilikom ispitivanja razmaza peritonealne tekućine kod životinja svih eksperimentalnih skupina bilježi se proliferacija stanica limfocita, histiocita, povećanje eozinofila, bazofila tkiva, plazmocita, stanica mezotelija i fibroblasta.

Procjena morfoloških svojstava bazofila, njihovog broja i funkcionalne aktivnosti od interesa su za proučavanje staničnog sastava peritonealne tekućine zaraženih životinja.

Utvrđeno je da u pokusnih bijelih miševa postoji fazni karakter promjene kvantitativnog sastava bazofila tkiva peritonealne tekućine. Povećanje njihovog broja kod životinja zaraženih Y. pestis subsp. pestis I-2638, bilježi se 60 minuta nakon uvođenja kulture, prelazeći vrijednosti u netaknutim životinjama za 2,6 puta (p< 0,05). Затем данные показатели снижаются (90-120 мин) до значений ин-тактных животных, к 180 мин вновь возрастают, достигая значений 8,5 против 2,5 в контроле (р < 0,05). Часть ТК представлены интестинальными - незрелыми формами (рис. 1), появление которых можно расценивать как процесс компенсации.

Lik: 1. Bijeli miš zaražen Y. pestis subsp. pestis I-2638. Peritonealna tekućina. Mastocite crijeva. Bojanje prema Romanovskom - Giemsa, uv. x 100.

U prvim terminima studije atipični MC čine 21,0 ± 1,8% od ukupnog broja MC, a posljednji se pokazatelji povećavaju na 25,2 ± 2,1%. Atipični TC imaju minimalni funkcionalni potencijal i mnogo su manji. Promjer stanice je 6,8-8,6 μm, što je u prosjeku 2,3 \u200b\u200bputa manje (str< 0,05), по сравнению с диаметром типичных ТК. Таких клеток значительно меньше в перитонеальной жидкости белых мышей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2359, и только в период 120-180 мин после заражения отмечаются единичные интестинальные тканевые базофилы. У животных других опытных групп атипичные ТК не выявляются.

Općenito, aktivacija MC sustava odražava opće prilagodljivo restrukturiranje tijela kao odgovor na uvođenje antigena. Degranulacija bazofila tkiva slijedi put cjelovite zrnaste egzocitoze (slika 2). Funkcionalna aktivnost bazofila tkiva peritonealne tekućine pokusnih životinja ima fazni karakter. Primjećuje se najveći IDTC

u bijelih miševa 60 minuta nakon infekcije Y. pestis subsp. pestis I-2638 - 3,9 ± 0,6, što je 18,5 puta (str< 0,01) выше значения у интактных животных, затем показатель резко снижается, но к 180 мин исследований он вновь повышается, превышая значение в контрольной группе в 4,4 раза (р < 0,01). У селекционных клонов Y. pestis subsp. pestis И-3479 и И-3480 максимальное значение индекса дегрануляции имеет место через 90 мин от начала опыта и составляет 2,0 ± 0,3 и 1,3 ± 0,4 соответственно, при этом у белых мышей II опытной группы показатели во все сроки исследования были выше, чем у животных III опытной группы.

Lik: 2. Bijeli miš zaražen Y. pestis subsp. pestis I-2638. Peritonealna tekućina. Mastociti. Degranulacija. Bojanje prema Romanovskom - Giemsa, uv. x 100.

Najizraženiji fazni karakter promjena u bazofilima tkiva uočen je kod bijelih miševa IV pokusne skupine. Maksimalna vrijednost IDTC pada na drugu i četvrtu fazu studije, prelazeći vrijednosti netaknutih životinja za 5,8 i 7,4 puta (p< 0,05) соответственно. У особей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2948/3, только на двух сроках исследования (60-90 мин) регистрируется увеличение дегрануляции тучных клеток в 3,6 и 2,6 раза соответственно (р < 0,05), в другие сроки данные статистически не значимы. У белых мышей V опытной группы максимальное значение ИДТК приходится на второй и последний срок исследования - 0,99 и 0,92 у. е., при в контроле отмечается 0,21 у. е.

ZAKLJUČAK

Dakle, razvoj zaraznog procesa u prvim satima nakon inokulacije uzročnika kuge ovisi o njegovom plazmidnom profilu, budući da su najočitije promjene u kvantitativnom i kvalitativnom staničnom sastavu peritonealne tekućine pronađene u pokusnih životinja nakon infekcije sojevima s pYP + pYV + pYT +.

Fazičnost otkrivena tijekom eksperimenta u promjeni kvantitativnog sastava mastocita peritonealne tekućine, posebno u osoba zaraženih virulentnim sojem Y. pestis subsp. pestis I-2638 (pYP + pYV + pTP33 + pYT +), kao i prisutnost nezrelih i atipičnih oblika MC ukazuje na razvoj procesa kompenzacije.

Općenito, aktivacija sustava mastocita odražava opće prilagodljivo restrukturiranje tijela kao odgovor na uvođenje antigena.

LITERATURA LITERATURA

1. Anisimov A.N. Čimbenici Ypestisa koji osiguravaju cirkulaciju i očuvanje uzročnika kuge u ekosustavima prirodnih žarišta. Poruka 1 // Molekularna genetika, mikrobiol. i virol. - 2002. - broj 3. - S. 3-23.

Anisimov A.N. Čimbenici Y. pestis koji osiguravaju cirkulaciju i očuvanje zaraznog agensa kuge u ekosustavima prirodnih žarišta. Izvještaj I // Molekuljarnaja genetika, mikrobiol. ja virusol. - 2002. - N 3. - P. 3-23. (na ruskom)

2. Balakhonov S.V. Otkrivanje nukleotidnih sekvenci gena pla, pstl i cafl na kriptičnom plazmidu 33 kd sojeva Yersiniapestis iz žarišta tuvanske kuge // 8th Int. Simp. na Yersiniji. -Turku, Finska, 2002. - br. 10. - S. 352-355.

Balakhonov S.V. Otkrivanje sekvenci nukleotida gena pla, pstl i cafl u kriptičnom plazmidu 33 kb sojeva Yersinia pestis iz fokusa kuge Tuva // 8th Int. Simp. na Yersiniji. - Turku, Finska, 2002. - br. 10. - str. 352-355. (na ruskom)

3. Vityazeva S.A., Starovoitova T.P., Bushkova A.V. Bazofili tkiva kao predstavnici velike stanične populacije APUD sustava. - Dep. u VINITI br. 376-B2010 dana 17.06.2010. - 18 str.

Vityazeva S.A., Starovoytova T.P., Bushkova A.V. Bazofili tkiva kao predstavnici brojne stanične populacije APUD-sustava. - Dep. u VINITI N 376-V2010 17.06.2010. - 18 str. (na ruskom)

4. Krasnozhenov EP, Fedorov Yu.V. Utjecaj zaraznog procesa na morfološke i funkcionalne značajke bazofila tkiva // Zh. mikrobiol., epidemiol. i imunola. - 1996. - broj 1. - S. 107-108.

Krasnozhenov E.P., Fedorov Yu.V. Utjecaj zaraznog procesa na morfofunkcionalne karakteristike

bazofila tkiva // Zhurn. mikrobiol., jepidemiol. ja imunol. - 1996. - Broj 1. - P. 107-108. (na ruskom)

5. Lebedeva S.A., Trukhachev A.L., Ivanova V.S., Arutyunov Yu.I. i drugo Varijabilnost uzročnika kuge i problemi njezine dijagnoze / Ed. S.A. Lebedeva. - Rostov na Donu: Antey, 2009. - 533 str.

Lebedeva S.A., Trukhachev A.L., Ivanova V.S., Arutyunov Yu.I. i sur. Raznolikost zaraznog uzročnika kuge i problemi njegove dijagnostike / Ur. od S.A. Lebedeva. -Rostov-on-Don: Antei, 2009. - 533 str. (na ruskom)

6. Menšikov V.V. i druge laboratorijske metode istraživanja u klinici. - M.: Medicina, 1987. - 365 str.

Menšikov V.V. i sur. Laboratorijske metode istraživanja u klinici. - Moskva: Medicina, 1987. - 365 str. (na ruskom)

Uobičajena serozna tekućina trbušne šupljine je bistra i svijetložuta, volumena manjeg od 50 ml. Ako se tekućina u trbušnoj šupljini nakuplja u značajnim količinama, naziva se ascitična. Ascites - trbušna vodenica, trbušna vodenica, značajno nakupljanje slobodne tekućine (obično transudata) u trbušnoj šupljini. Ascites se može dogoditi iznenada (na primjer, kod tromboze portalne vene) ili se razvijati postupno, tijekom nekoliko mjeseci, popraćen nadimanjem, koje u početku može dominirati kliničkom slikom. Ponekad se u peritonealnoj šupljini nakuplja od 8 do 30 litara ascitne tekućine. Fizičkim pregledom pacijenta može se prepoznati ascites ako u peritonealnoj šupljini ima najmanje 1 litre tekućine.

DOBIJANJE I OBRADA MATERIJALA ZA LABORATORIJSKO ISTRAŽIVANJE
Serozna tekućina trbušne šupljine dobiva se punkcijom rektalno-maternične šupljine (Douglasov prostor, džep) (culldocentesis), perkutanom punkcijom (paracenteza) ili laparoskopijom.

Istodobno, treba uzeti 5 ml venske krvi kako bi se odredio gradijent "serumsko-ascitesne tekućine" za albumin i druge biokemijske parametre.

Preporučljivo je provesti citološki pregled ascitne tekućine odmah nakon što se uzorak preda u laboratorij. Ako je hitna analiza nemoguća, uzorak treba čuvati u hladnjaku ne više od 12 sati, koristeći heparin ili natrijev citrat kao antikoagulant.

KLINIČKO-DIJAGNOSTIČKA VRIJEDNOST PROMJENE POKAZATELJA SEROUSNE TEČNOSTI U ABDOMINALNOJ ŠUPLJINI
Glavni zadaci laboratorijske analize ascitne tekućine su:
utvrđivanje benigne ili zloćudne prirode izljeva;
diferencijacija neinfekcije / infekcije tekućine.

Ascites u portalnoj hipertenziji, hepatocelularnom karcinomu i metastazama u jetri bez širenja duž peritoneuma je transudat.

Ascites kod bolesti jetre, u slučajevima pankreatitisa, peritonealne tuberkuloze i kod malignih tumora s metastazama u peritoneumu, u pravilu je rezultat eksudata.

Razvijeni su odgovarajući laboratorijski kriteriji za diferencijalnu dijagnozu portalnih i malignih (peritonealnih metastaza) vrsta ascitesa. Glavni laboratorijski pokazatelji razdvajanja ascitesa u eksudat i transudat u odsutnosti malignih stanica su sadržaj albumina, razina kolesterola i fibronektina. Transudat je karakteriziran visokim gradijentom albumina između seruma i ascitne tekućine (\u003e 11 g / L), za eksudat, naprotiv, ascitna tekućina sadrži veliku količinu albumina, a gradijent za albumin između ascitne tekućine i seruma je beznačajan (
U slučaju hilozne ascitne tekućine prikazano je određivanje triglicerida u njoj i postavljanje lipoproteinske elektroforeze. Razina antigena embrionalnog antigena više od 2,5 μg / L ascitne tekućine ima visoku kliničku specifičnost i prognostičku vrijednost, blizu 100% za tumor s metastazama u peritoneumu.

Prilikom ispitivanja albumina, uzorci seruma i ascitne tekućine trebaju se uzimati istovremeno. Koncentraciju albumina u ascitnoj tekućini treba odrediti imunonefelometrijskim ili imunoturbidimetrijskim metodama. Fotometrijsko određivanje albumina bromkrezol zelenim daje precijenjene rezultate pri koncentraciji albumina većoj od 7 g / L, stoga ova metoda nije prikladna za određivanje gradijenta albumina. Ukupna razina proteina veća od 30 g / l za dijagnozu transudata ima dijagnostičku specifičnost od 86% i dijagnostičku specifičnost od 83%.

Brojanje i diferencijacija stanica za određivanje neutrofilnih granulocita provodi se u EDTA-ascitnoj tekućini. Ako u uzorku ima krvi, tada je potrebno utvrditi:
omjer eritrocita i leukocita za procjenu mogućnosti krvarenja iz gastrointestinalnog trakta ili primjesa "putne" krvi;
sadržaj leukocita (njihov visok relativni broj ukazuje na upalni proces);
sadržaj neutrofilnih granulocita (asciti s prevladavanjem i apsolutnim udjelom neutrofila više od 250 / μl klasificiraju se kao zarazni).

Ako se citološki pregled ne može izvršiti u roku od 12 sati, uzorak se može čuvati u hladnjaku do 2 dana, ali materijal treba učvrstiti dodavanjem 50% alkohola u omjeru 1: 1.
Određivanje patogene mikroflore u ascitnoj tekućini provodi se na isti način kao i u krvi - uzgojem u aerobnim i anaerobnim uvjetima.

OPĆA SVOJSTVA (MAKROSKOPSKA TEKUĆINA)
Ascitna (peritonealna) tekućina po svojoj je prirodi češće serozna, rjeđe hemoragična, kile, sluzava. Lagana, prozirna ili sa žućkastom nijansom, ascitna tekućina je češće transudat. Zamućena serozna tekućina karakteristična je za peritonitis, koji se javlja kao komplikacija upala slijepog crijeva, pankreatitisa, crijevne opstrukcije i primarne bakterijske infekcije. Zelenkaste boje, bojenje žuči javlja se kod perforacije žučnog mjehura, žarulje dvanaesnika, tankog crijeva, kao i kod kolecistitisa, akutnog pankreatitisa. Ascitna tekućina dobiva zelenkastu boju kada koncentracija bilirubina u njoj prelazi 100 μmol / l. Ako je koncentracija bilirubina u ascitnoj tekućini veća nego u serumu, to je dokaz perforacije žučnog kanala ili mokraćnog mjehura. Mliječna pojava serozne tekućine (hilozni izljev) pojavljuje se s velikim brojem hilomikrona u ascitnoj tekućini. To se najčešće događa s oštećenjem ili začepljenjem torakalnog limfnog kanala uzrokovanom tuberkulozom, cirozom jetre, a može se dogoditi i s leukemijom (limfomom). Moguća pseudokilozna infuzija uz uvođenje velike količine nadomjestaka krvi za pacijenta.

Hemoragična serozna tekućina trbušne šupljine može se pojaviti s trbušnom traumom s puknućem unutarnjih organa, posebno s puknućem jajovoda tijekom ektopične trudnoće, kao i sa širenjem malignog tumora duž serozne membrane. Tekućina ima grimiznu boju s primjesom "putne" krvi tijekom paracenteze. Ascitna tekućina dobiva smeđu boju zbog krvarenja u trbušnu šupljinu s tuberkuloznim peritonitisom, metastazama u peritoneumu i nakon traumatičnih ozljeda trbušnih organa. U integralnoj procjeni stanja bolesnika s peritonitisom koristi se Mannheimov indeks peritoneuma pri čijem je izračunu jedan od najznačajnijih pokazatelja priroda eksudata

BIOKEMIJSKI POKAZATELJI
Sljedeći čimbenici uglavnom utječu na koncentraciju ukupnih proteina u ascitnoj tekućini:
koncentracija ukupnih proteina u serumu, s kojom je razina proteina u ascitnoj tekućini u izravnoj vezi;
razina portalne hipertenzije, s kojom postoji obrnuta povezanost. Uz to, na koncentraciju ukupnih bjelančevina u ascitnoj tekućini utječe i
uzimanje diuretika.

Indikacije za određivanje ukupnog proteina u ascitnoj tekućini su:
profilaktički antibiotici za sprečavanje bakterijskog peritonitisa;
diferencijalna dijagnoza primarnog i sekundarnog (uvedenog) bakterijskog peritonitisa;
ascites kod zatajenja srca.

Ukupni proteini
Na pragu vrijednosti ukupnog sadržaja proteina u ascitnoj tekućini od 25 g / l, klasične ideje o odvajanju transudata i eksudata na osnovi znojenja proteina potvrđuje samo 56%, odnosno praktički nemaju laboratorijsku potvrdu . To je zbog činjenice da je ukupan sadržaj bjelančevina u zaraznoj etiologiji ascitesa nizak, iako je eksudativna priroda ascitesa neosporna. S druge strane, ukupni sadržaj bjelančevina u ascitnoj tekućini visok je u bolesnika sa zatajenjem srca, u kojih se ascitna tekućina smatra transudatom.

Ukupna koncentracija proteina veća od 30 g / L ukazuje na eksudat s kliničkom osjetljivošću od 93% i specifičnošću od 85%. Omjer proteina veći od -5 ukazuje na eksudat s kliničkom osjetljivošću od 93%, a specifičnost od 85%. U ascitesu uzrokovanom malignim tumorima, s izuzetkom hepatocelularnog karcinoma, ukupna koncentracija proteina je 49-65 g / l, dok je kod ciroze jetre i hepatocelularnog karcinoma u rasponu od 17-21 g / l. Pacijenti s cirozom jetre i razinom proteina u ascitnoj tekućini manjoj od 15 g / L imaju lošu prognozu. Niska razina bjelančevina u ascitnoj tekućini karakteristična je za zaraznu prirodu ascitesa, istodobno, sa sekundarnom bakterijskom infekcijom i s tuberkuloznim peritonitisom, u ascitnoj tekućini stalno se određuje razina bjelančevina više od 30 g / l .

Albumini
Gradijent albumina između seruma i ascitne tekućine određuje se razinom portalne hipertenzije. Pacijenti s gradijentom albumina većim od 11 g / L imaju portalnu hipertenziju, dok oni s gradijentom manjim od 11 g / L nemaju. U cirozi jetre s portalnom hipertenzijom, gradijent albumina veći od 11 g / l ima kliničku specifičnost od 97%. Ascites u mješovitim vrstama - zbog ciroze jetre i metastaza u peritoneumu ili ciroze jetre i tuberkuloznog peritonitisa - također su praćeni gradijentom albumina većim od 11 g / l.

Za razlikovanje transudata od eksudata gradijent albumina je važniji od ukupnog proteina. Treba imati na umu da se kod primjene diuretika ili paracenteze razina albumina i ukupnih proteina u ascitnoj tekućini mijenja.

U bolesnika s uznapredovalim peritonitisom, stupanj smanjenja koncentracije albumina u serumu visoko je informativni prognostički pokazatelj koji omogućuje procjenu težine bolesti i rizika od nepovoljnog ishoda. Smanjenje razine albumina u krvi događa se kako zbog povećanja katabolizma proteina, karakterističnog za akutnu fazu bilo kojeg upalnog procesa, tako i zbog izlučivanja u trbušnu šupljinu. Peritonealni eksudat sadrži značajnu količinu proteina. Vjeruje se da se do 50% sve izvanćelijske tekućine u tijelu može premjestiti u trbušnu šupljinu. S razvojem edema, isprva se proces apsorpcije tekućine peritoneumom čak ubrzava, ali onda, zbog kršenja mikrocirkulacije, naglo usporava - događa se nakupljanje eksudata. Određena količina proteina, uključujući albumin, oslobođen iz krvotoka, gubi se u tijelu; visok izljev bjelančevina dovodi do hipoalbuminemije. Uz to, uvijek postoji značajan edem pre- i retroperitonealnog tkiva i drugih tkiva zbog djelovanja biološki aktivnih tvari: enzima, kinina, histamina, zbog čega se albumin taloži u tkivima. Zajedno sa smanjenjem sinteze (albumin je negativni reaktant akutne faze upale) i povećanjem propadanja (prevladavanje kataboličkih procesa u tijelu), oslobađanje albumina u trbušnu šupljinu i njegovo taloženje u edematoznim tkivima su glavni razlog prognostički nepovoljne pojave - smanjenje koncentracije albumina u krvnom serumu.

Prodiranje albumina iz krvi u izljev karakterizira vrijednost ukupne koncentracije albumina u izljevu. U većini slučajeva ukupna koncentracija albumina u izljevu usko je u korelaciji s vrijednošću ukupne koncentracije albumina u izljevu (koncentracija albumina u serumu). U slučajevima kada je ukupna koncentracija albumina u izljevu\u003e 34 g / L, a ukupna koncentracija albumina u izljevu je znatno niža od ukupne koncentracije albumina u izljevu, pacijenti imaju blagi tijek postoperativnog razdoblja; ishod bolesti je povoljan; ispuštanje kroz drenažu je beznačajno.

U slučajevima značajnih razlika u stanju albumina u izljevu i serumu, vrijednost ukupne koncentracije albumina u izljevu nije povezana s koncentracijom albumina u krvi; očito, postoji proteolitički učinak na albumin u eksudatu, što dovodi do njegove promjene i uništenja. U ostalim slučajevima, apsolutna vrijednost ukupne koncentracije albumina u izljevu ovisi o vrijednosti ukupne koncentracije albumina u izljevu, a ne o aktivnosti upalnog procesa u trbušnoj šupljini. Za karakterizaciju težine upalnog procesa u trbušnoj šupljini prikladan je omjer ukupne koncentracije albumina u izljevu, koji karakterizira stupanj propusnosti krvožilne stijenke za albumin. Parametar ukupne koncentracije albumina u izljevu odražava ozbiljnost stanja pacijenta, a parametar ukupne koncentracije albumina u izljevu odražava težinu upalnog procesa u trbušnoj šupljini.

Endotoksin
U bolesnika s fekalnim peritonitisom (perforacija debelog crijeva), koncentracija endotoksina u peritonealnoj tekućini može doseći 1000 μg / L. U difuznom bakterijskom peritonitisu koncentracija endotoksina obično je relativno niska. Ako u postoperativnom razdoblju mikroflora debelog crijeva nastavi ulaziti u trbušnu šupljinu (endotoksin u peritonealnoj tekućini raste), to je vrlo velika opasnost od difuznog peritonitisa i smrti pacijenta.

Glukoza
U nebakterijskom peritonitisu vrijednost omjera glukoza-ascitna tekućina / glukoplazma veća je od 1, u slučaju bakterijskog peritonitisa ta je vrijednost manja od 1. Koncentracija glukoze u ascitnoj tekućini manja je od 2,8 mmol / l. karakteristična za bakterijski peritonitis. U većini slučajeva tuberkuloznog peritonitisa koncentracija glukoze u ascitnoj tekućini manja je od 1,7 mmol / l. Također se smanjuje kod malignih tumora s metastazama, koji su uzročnici ascitesa.

BAKTERIOLOŠKA STUDIJA
Kada je peritonealna tekućina zaražena monokulturom, studije kulture imaju kliničku osjetljivost veću od 85-90%, dok je takav pokazatelj kao sadržaj neutrofilnih granulocita / μl veći od 250 - samo 50%. Bakteriološke studije pokazuju da u 70% slučajeva postoji gram-negativna mikroflora, obično E. coli, u 20% slučajeva - gram-pozitivna.

Etiološki značaj anaerobnih mikroorganizama dokazan je kod svih kompliciranih intraabdominalnih infekcija, gdje su dio polimikrobnih udruga. Clostridium perfringens i Clostridium septicum sudjeluju u razvoju sekundarnog peritonitisa, intraabdominalnog apscesa i sepse u perforaciji debelog crijeva i terminalnog ileuma. S kompliciranim tumorima debelog crijeva, 70-85% bolesnika ima bakterijemiju zbog Clostridium septicum. Kod slijepog crijeva bilophila wadsworthia izlučuje se iz izljeva. Mješovite infekcije često uključuju Peptococcus spp., Peptostreccoccus spp. Javljaju se u 90-95% slučajeva, Actinomyces spp., Prevotella spp., Lactobacillus spp., Fusobacterium spp. najteže u dijagnozi i liječenju aktinomikotičnih apscesa jetre. Bakteroidi, prvenstveno Bacteroides fragilis i Bacteroides thetaiotaomicron, vodeći su kod intraabdominalnih infekcija. Učestalost izolacije Bacteroides fragilis u sekundarnom peritonitisu doseže 22,8-44,5%. Postoje dokazi o etiološkom značaju anaeroba u primarnom peritonitisu. Clostridium perfringens i Bacteroides fragilis izlučuju se kod svih bolesnika s infekcijama žučnih puteva s znakovima hipertenzije žuči ili endoprotezama koje osiguravaju prohodnost zajedničkog žučnog kanala. Kod pankreatitisa, bakteroidi i klostridije su izolirani među patogenima u 5-14% slučajeva. U bolničkoj intraabdominalnoj infekciji značajna je povezanost multirezistentnih enterobakterija, Pseudomonas aeruginosa, enterokoka i anaeroba. Infekcije rana u bolesnika nakon intervencija u trbuhu u 3,9% uzrokovane su Bacteroides spp., U 1,1% - Clostridium perfringens. Razvoj peritonitisa i smrtnost kod intraabdominalne infekcije posljedica su gram negativnih aeroba, a stvaranje apscesa u trbuhu kod preživjelih anaerobne mikroflore.

Progresivni mikrobno-upalni proces u trbušnoj šupljini (u pozadini operativne ozljede, smanjenja otpora tijela itd.) Odvija se vrlo brzo i u roku od 4-5 dana može doseći fazu koja zahtijeva kiruršku intervenciju. Dinamičnost procesa, velika vjerojatnost reinfekcije, razvoj rezistencije na mikrofloru zahtijevaju empirijski propisivanje antibakterijske terapije istovremeno s indikativnom mikrobiološkom brzom analizom (mikroskopija, plinska kromatografija) i procjenu osjetljivosti mikroorganizama u kliničkom materijalu pomoću diskova s antibioticima, te stalno praćenje bakteriološke situacije u žarištu upale. Rutinska bakteriološka metoda uzgoja omogućuje dobivanje rezultata 24-72 sata nakon početka studije, otkrivajući prirodu patogene mikroflore, potvrđujući točan odabir antibiotske terapije ili sugerirajući potrebu za njezinom korekcijom. Neophodno je stalno mikrobiološko praćenje, jer se mikrobiološka situacija u žarištu infekcije može značajno promijeniti tijekom patološkog procesa i zahtijevati promjenu terapije.

STUDIJA KRVNIH STANICA
Eritrociti u EDTA ascitnoj tekućini
Tekućina za peritonealno ispiranje sadrži manje od 25 000 eritrocita / μL. U ascitnoj tekućini eritrociti se nakupljaju nakon traume ili su manifestacija tuberkuloznih ili malignih lezija peritoneuma. Sličan omjer broja eritrocita i leukocita u ascitnoj tekućini i krvi ukazuje na jatrogenu ozljedu ("putnu" krv) ili krvarenje u trbušnu šupljinu.

Leukociti
Određivanje leukocita u peritonealnoj tekućini može se provesti kvantitativno brojanjem u komori Goryaev ili polukvantitativno pomoću dijagnostičkih traka pomoću testne zone za određivanje leukocita. Osjetljivost testne zone na leukocite je 3000 stanica / μl. Dijagnostička osjetljivost otkrivanja leukocita suhom kemijskom metodom u peritonealnoj tekućini je 88%, specifičnost je 94%.

Broj leukocita u ascitnoj tekućini, pH i koncentracija laktata tijekom infekcije ascitesnom tekućinom značajno se razlikuju od vrijednosti ovih pokazatelja u sterilnom ascitesu, međutim, sve se te vrijednosti približno razlikuju u istoj vrsti i to nije moguće razlikovati ascites u tumoru i zarazni peritonitis.

Relativni sadržaj neutrofilnih granulocita više od 25% populacije leukocita ascitne tekućine smatra se patološkim i karakterističnim za bakterijski peritonitis. U bolesnika s cirozom jetre, broj leukocita u ascitnoj tekućini obrnuto je proporcionalan volumenu tekućine. Broj leukocita u ascitnoj tekućini povećava se smanjenjem volumena ascitesa kao rezultat liječenja diureticima, dok se relativni sadržaj neutrofila u formuli leukocita ne mijenja.

Ako je broj leukocita veći od 500 / μl, posebno ako je broj granulocita veći od 250 / μl, postoji velika vjerojatnost primarnog bakterijskog peritonitisa. U ovom slučaju, dijagnostička specifičnost potvrde ove dijagnoze je 93%, osjetljivost je 84%. Kod karcinoma gušterače i hepatocelularnog karcinoma postoji umjerena leukocitoza - 300-1000 / μl. Uz alkoholnu cirozu, broj leukocita u ascitnoj tekućini raste na 1100-21.000 / μl.

Limfocitoza u ascitnoj tekućini znak je dugotrajne ustajale eksudacije, kronične upale, tuberkuloze ili tumorskog procesa. U bolesnika s cirozom jetre i hilosnom ascitnom tekućinom, relativni sadržaj limfocita u njoj je od 12 do 96%, u prosjeku 70%.

Oznake tumora
Ugljikohidratni antigen 19-9
U ascitnoj tekućini na pragu vrijednosti (diskriminantna razina) od 30 U / ml, dijagnostička osjetljivost malignog tumora iznosi 52%, a dijagnostička specifičnost 100%.

Rak-embrionalni antigen
Proučavanje antigena embrionalnog karcinoma u ascitnoj tekućini omogućuje razlikovanje benignih i malignih bolesti s dijagnostičkom specifičnošću i osjetljivošću od 83%. S graničnom vrijednošću embrionalnog antigena karcinoma od 2,5 μg / ml, dijagnostička osjetljivost je 45%, dijagnostička specifičnost je 100%. Ako se određivanje antigena karcinoma-embriona u ascitnoj tekućini kombinira sa ispitivanjem prisutnosti tumorskih stanica, dijagnostička osjetljivost u slučaju zloćudnog tumora povećava se na 80%. Treba napomenuti da je proučavanje embrionalnog antigena karcinoma u ascitnoj tekućini malo važno za dijagnozu difuznog malignog mezotelioma: antigen karcinoma i embriona određuje se samo u 1-9% slučajeva ove patologije. Istodobno, rak-embrionalni antigen određuje se u 80% slučajeva ascitesa povezanih s lezijama tumora u raku želuca, dojke, pluća.

CITOLOŠKA STUDIJA
Najveća analitička osjetljivost postiže se tijekom citološkog ispitivanja pripravaka obojenih prema Pappenheimu i Leishmanu, a po potrebi i dodatnim citokemijskim ispitivanjem. Dijagnostička osjetljivost otkrivanja tumorskih stanica pod svjetlosnim mikroskopom iznosi 40-70%. Ako je moguće dobiti stanice od 200 ml ili više ascitne tekućine, dijagnostička osjetljivost povećava se na 70-90% s gotovo 100% dijagnostičke specifičnosti. Ponekad laboratorijsko otkrivanje tumorskih stanica u ascitnoj tekućini prethodi kliničkoj manifestaciji tumora za 3 godine ili više.

U žena se tumorske stanice u ascitnoj tekućini silaznim redoslijedom češće nalaze u tumorima genitalnog trakta, posebno jajnika, zatim karcinoma dojke i gastrointestinalnog trakta. U muškaraca se širenje duž peritoneuma najčešće određuje s tumorima gastrointestinalnog trakta, leukemijom. U oko 80% slučajeva tumor je povezan s adenokarcinomom. Od patoloških procesa koji su karakteristični za lezije peritoneuma i praktički se ne javljaju u pleuri i perikardu, treba istaknuti pseudomiksom peritoneuma.

Poraz peritoneuma uočava se kod mucinoznog tumora, najčešće graničnog mucinoznog tumora jajnika ili mukocele slijepog crijeva, kao i kod visoko diferenciranog mucinoznog adenokarcinoma jajnika ili slijepog crijeva. Vjeruje se da se lezija može razviti puknućem cističnog tumora i generaliziranom diseminacijom tumorskih stanica u trbušnoj šupljini. Istodobno se u trbušnoj šupljini nakuplja velika količina sluzi koju je teško usisati zbog velike gustoće. Aspiratni brisevi za pseudomiksom peritoneuma sadrže veliku količinu pozitivne sluzi koja je rezistentna na hijaluronidazu. Stanica tumora, u pravilu, ima malo ili ih nema u nekoliko pripravaka, stoga je za postavljanje dijagnoze često potrebno pregledati nekoliko razmaza ili izvesti drugu punkciju.

Da biste utvrdili dobroćudnu ili zloćudnu prirodu lezije, trebali biste biti vrlo oprezni. U dobroćudnoj leziji, stanice male veličine, s malim tamnim jezgrama, umjereno obilnom citoplazmom, sadrže vakuole u citoplazmi. Sluz često sadrži niti fibrocita. Zaključak o zloćudnom procesu nemoguće je izvesti samo na temelju otkrivanja velike količine sluzi, jer je to možda rezultat puknuća mukokele slijepog crijeva ili dobroćudnog mucinoznog cistadenoma jajnika. Naročito treba paziti u slučajevima kada se sluz iz dobroćudnog tumora kombinira sa skupinama mezotelnih stanica s reaktivnim promjenama. Da biste utvrdili prirodu lezije, trebali biste pažljivo ispitati stanice koje stvaraju sluz na prisutnost ili odsutnost znakova malignosti.