Problemi moderni della scienza e dell'educazione. I successi delle moderne scienze naturali Come contare l'analisi del liquido peritoneale

Il profilo proteomico del fluido peritoneale nell'endometriosi genitale esterna è stato studiato utilizzando l'elettroforesi bidimensionale e la spettrometria di massa del tempo di volo. Sono state rilevate proteine \u200b\u200bdi differenze che compaiono nell'endometriosi genitale esterna: apolipoproteina A-IV, globulina che lega gli ormoni sessuali, componenti del sistema del complemento C3 e C4b. Le proteine \u200b\u200bche sono assenti nell'endometriosi genitale esterna includono il fattore di differenziazione dell'epitelio pigmentato, transtiretina, aptoglobina, α-1-antitripsina e un inibitore dell'apoptosi 6. Il possibile ruolo delle proteine \u200b\u200bidentificate nello sviluppo dei principali disturbi dell'endometriosi è discusso. Le proteine \u200b\u200bdi differenza rilevate possono essere utilizzate come marcatori di questa malattia.

endometriosi genitale esterna

liquido peritoneale

analisi proteomica

differenze proteiche

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L'importanza dello studio dell'endometriosi genitale esterna (EGE) è associata all'alta frequenza della diffusione di questa patologia tra le donne in età fertile e al suo impatto significativo sulla loro salute riproduttiva e sul tenore di vita. Attualmente viene mostrato l'importante ruolo del fluido peritoneale (RV) nella patogenesi dell'endometriosi, poiché è in esso che si verifica lo sviluppo e la crescita dei focolai endometrioidi. Lo studio della composizione proteica del pancreas mediante tecnologie proteomiche finalizzate allo studio dell'insieme delle proteine \u200b\u200bespresse dal genoma crea opportunità qualitativamente nuove per approfondire la comprensione dei meccanismi molecolari dello sviluppo dell'endometriosi, la sua previsione e diagnosi precoce.

Obbiettivo... Studiare lo spettro proteomico del pancreas di donne con e senza IGE.

Materiali e metodi di ricerca

Lo studio ha incluso 20 pazienti in età riproduttiva (età media 29,3 ± 0,3 anni), di cui 10 pazienti con EGE con stadi III-IV della malattia secondo la classificazione r-AFS (gruppo principale) e 10 senza endometriosi (gruppo di controllo) . Il materiale di ricerca era il pancreas ottenuto dallo spazio uterino posteriore durante la laparoscopia. L'analisi proteomica del pancreas è stata effettuata utilizzando l'elettroforesi bidimensionale in gel di poliacrilammide (Protein IEFCell e ProteanIIxiMulti-Cell devices, Bio-Rad, USA) seguita dalla colorazione delle proteine \u200b\u200bcon ioni d'argento. L'identificazione delle proteine \u200b\u200bdopo la tripsinolisi è stata effettuata mediante spettrometria di massa MALDI a tempo di volo su uno spettrometro di massa Autoflex II (Bruker, Germania) utilizzando il software MascotMSSearch (MatrixScience, USA) e le banche dati NCBI e Swiss-Prot. I risultati di l'identificazione delle proteine \u200b\u200bè stata considerata affidabile a livello di significatività non inferiore al 95% e tasso di copertura della sequenza non inferiore al 60%.

La significatività delle differenze nello spettro proteomico del pancreas delle donne nel gruppo di controllo e principale è stata determinata utilizzando il c2-test (STATISTICA versione 6.0. Da StatSoft. Jnc.). I risultati sono stati valutati come statisticamente significativi a p<0,05.

Risultati della ricerca e discussione

Come risultato dell'analisi proteomica eseguita del pancreas, sono state rilevate una serie di proteine \u200b\u200bdi differenza, la cui presenza o assenza si verifica solo durante IGE (vedi tabella, fig.). Pertanto, nel pancreas delle donne nel gruppo principale, è stata stabilita la comparsa delle seguenti proteine: apolipoproteina A-IV, globulina legante gli ormoni sessuali (SHBG), componenti del sistema del complemento C3 e C4b, che non sono stati trovati nei pazienti del controllo gruppo.

Tabella 1

Identificate proteine \u200b\u200bpancreatiche di donne nei gruppi di controllo e di studio

	Nome della proteina
	α-1-antitripsina
	Fattore di differenziazione dell'epitelio pigmentato
	Componente del sistema di complemento C3
	Apolipoproteina A-IV
	Aptoglobina
	Globulina che lega gli ormoni sessuali
	Inibitore dell'apoptosi 6
	Componente del sistema del complemento C4-b
	Transtiretina

Nota: pI - punto isoelettrico, Mm - peso molecolare, "+" - presenza di proteine, "-" - assenza di proteine, p - significato delle differenze tra i gruppi.

E B

Figura: 1. Mappe proteomiche del liquido peritoneale delle donne nei gruppi di controllo (A) e principale (B)

Nota. La numerazione delle proteine \u200b\u200bcorrisponde a quella nella tabella

Un aumento della produzione (e, di conseguenza, della comparsa nel pancreas) di apolipoproteina A-IV, che ha proprietà antiossidanti e antinfiammatorie, ha ovviamente un valore compensatorio in condizioni di stress ossidativo e infiammazione che accompagna lo sviluppo di questa patologia.

L'aumento del contenuto di SHBG nell'endometriosi, che regola la biodisponibilità degli ormoni steroidei per le cellule endometriali, crea le condizioni per l'iperestrogenismo locale. In queste condizioni, diventa possibile aumentare il potenziale proliferativo delle cellule eterotopiche endometrioidi.

L'aumento della secrezione da parte dei macrofagi peritoneali dei componenti del sistema del complemento C3 e C4b, che sono coinvolti nella risposta infiammatoria, nella neutralizzazione delle cellule apoptotiche e degli immunocomplessi, fornisce un certo contributo ai meccanismi di sviluppo dell'endometriosi e dell'infertilità associata all'endometriosi.

Insieme a queste deviazioni in IGE, 5 proteine \u200b\u200bsono assenti nello spettro proteomico pancreatico: il fattore di differenziazione dell'epitelio pigmentato, transtiretina, inibitore dell'apoptosi 6, aptoglobina e α-1-antitripsina.

Il fattore di differenziazione dell'epitelio pigmentato è uno dei più potenti fattori antiangiogenici e antiproliferativi; pertanto, l'inibizione della sua espressione può essere uno dei motivi che portano ad una diminuzione dell'apoptosi endometriale e ad un aumento dell'angiogenesi, favorendo l'impianto e la crescita di eterotopie.

L'assenza nel pancreas delle donne del gruppo principale della transtiretina, che trasporta T3 e T4, crea apparentemente un eccesso locale di ormoni tiroidei, il cui effetto tossico porta a danni agli organi riproduttivi. Gli ormoni tiroidei, modulando gli effetti degli estrogeni a livello cellulare, possono contribuire allo sviluppo di disturbi dell'isto- e organogenesi delle strutture sensibili agli ormoni e ad un peggioramento del decorso dell'endometriosi.

Tra le proteine \u200b\u200bnon identificate nell'IGE, un ruolo importante nella regolazione della risposta immunitaria è svolto dall'inibitore dell'apoptosi 6 secreto dai macrofagi. È possibile che sia la violazione dell'espressione di questa proteina che porta alla formazione di uno squilibrio di cellule immunocompetenti nel pancreas (a causa della soppressione dell'apoptosi dei linfociti T e delle cellule NK).

Si può pensare che l'assenza dell'aptoglobina antiossidante non enzimatica nel pancreas contribuisca all'intensificazione dello stress ossidativo che si sviluppa nell'endometriosi.

Con questa patologia, anche l'α-1-antitripsina, un inibitore delle serina proteasi, che sono direttamente coinvolte nell'invasione delle cellule endometriali, non è stata trovata nel pancreas, che, a quanto pare, causa uno squilibrio nel sistema inibitore della proteasi, promuovendo l'impianto di cellule endometriali.

Gli studi effettuati indicano che lo sviluppo dell'endometriosi avviene sullo sfondo di cambiamenti nella produzione di una serie di importanti proteine \u200b\u200bcoinvolte nella regolazione dell'azione ormonale, angiogenesi, apoptosi, processi redox, infiammazione e risposta immunitaria.

risultati

1. La modifica dello spettro proteomico del pancreas è un importante fattore patogenetico nello sviluppo di IGE.

2. Le proteine \u200b\u200bche sono assenti o compaiono nel pancreas nell'endometriosi possono servire come indicatori informativi di questa malattia.

Revisori:

Avrutskaya VV, dottore in scienze mediche, ricercatore capo del dipartimento di ostetricia e ginecologia, capo del dipartimento ambulatoriale dell'istituto di bilancio dello Stato federale "RNIIAP" del ministero della Salute russo. Istituto di bilancio statale federale "Istituto di ricerca di ostetricia e pediatria di Rostov" del Ministero della salute della Russia, Rostov-sul-Don;

Kaushanskaya LV, MD, DSc, ricercatore capo del dipartimento di ostetricia e ginecologia dell'Istituto di bilancio dello Stato federale "RNIIAP" del ministero della Salute russo. Istituzione di bilancio dello Stato federale "Istituto di ricerca di ostetricia e pediatria di Rostov" del Ministero della salute della Russia, Rostov-sul-Don.

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URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id\u003d17171 (data di accesso: 02/01/2020). Portiamo alla vostra attenzione le riviste pubblicate dalla "Academy of Natural Sciences"

L'accumulo di liquido libero nella cavità addominale si verifica a seguito di una reazione infiammatoria, flusso linfatico alterato e circolazione sanguigna per vari motivi. Questa condizione è chiamata ascite (idropisia) e il suo aspetto può portare allo sviluppo di gravi conseguenze per la salute umana.

Il fluido accumulato nel peritoneo è un habitat ideale per la microflora patogena, che è l'agente eziologico di peritonite, sindrome epatorenale, ernia ombelicale, encefalopatia epatica e altre patologie altrettanto pericolose.

Per diagnosticare l'ascite, viene utilizzato uno dei metodi più sicuri e non invasivi, ma altamente accurati: uno studio che utilizza onde ultrasoniche. La rilevazione della presenza di liquido nella cavità addominale mediante ultrasuoni viene eseguita come indicato dal medico curante sulla base dei segni clinici esistenti del processo patologico.

La cavità addominale è una zona anatomicamente separata, che rilascia costantemente umidità per migliorare lo scorrimento dei fogli viscerali del peritoneo. Normalmente, questo versamento è in grado di essere assorbito dinamicamente e non accumularsi in aree a esso convenienti. Nel nostro articolo, vogliamo fornire informazioni sulle cause della riserva anormale di liquidi, diagnosticare una condizione patologica mediante ultrasuoni e metodi efficaci del suo trattamento.

Perché il liquido libero si accumula nella cavità addominale?

L'ascite si sviluppa a causa di vari tipi di processi patologici negli organi pelvici. Inizialmente, il trasudato accumulato non ha una natura infiammatoria, la sua quantità può variare da 30 ml a 10-12 litri. Le cause più comuni del suo sviluppo sono la ridotta secrezione di proteine, che garantiscono l'impermeabilità dei tessuti e delle vie che conducono la linfa e il sangue circolante.

Questa condizione può provocare anomalie congenite o sviluppo nel corpo:

cirrosi epatica;
insufficienza cardiaca o renale cronica;
ipertensione portale;
fame di proteine;
linfostasi;
lesioni tubercolari o maligne del peritoneo;
diabete mellito;
lupus eritematoso sistemico.

Spesso, l'idropisia si sviluppa durante la formazione di formazioni simili a tumori nelle ghiandole mammarie, nelle ovaie, negli organi digestivi, nelle membrane sierose della pleura e del peritoneo. Inoltre, il liquido libero può accumularsi sullo sfondo di complicanze del periodo postoperatorio, pseudomixoma del peritoneo (accumulo di muco che subisce riorganizzazione nel tempo), distrofia amiloide (violazione del metabolismo proteico), coma ipotiroideo (mixedema).

Il meccanismo per la formazione dell'idropisia è l'infiltrazione nella cavità addominale di fluido dai principali dotti linfatici, vasi sanguigni e tessuti degli organi

Segni di ascite

Nelle prime fasi dello sviluppo di questa condizione, i pazienti non hanno alcun reclamo, l'accumulo di liquido libero può essere rilevato solo mediante ultrasuoni. I sintomi visibili compaiono quando la quantità di trasudato supera un litro e mezzo, una persona sente:

un aumento dell'addome addominale e del peso corporeo;
deterioramento della salute generale;
una sensazione di pienezza nella cavità addominale;
gonfiore degli arti inferiori e dei tessuti scrotali (negli uomini);
eruttazione;
bruciore di stomaco;
nausea;
respirazione difficoltosa;
flatulenza;
tachicardia;
protrusione del nodo ombelicale;
disagio e dolore all'addome;
disturbi delle feci e delle vie urinarie.

Quando una grande quantità di versamento si accumula nel peritoneo, una persona può sentire un caratteristico spruzzo di fluido e sentire un'onda.

Se un esame ecografico della cavità addominale mostra che c'è umidità in eccesso, il medico curante deve stabilire con precisione la causa principale della condizione patologica. Il pompaggio del trasudato accumulato non è un metodo efficace per trattare l'ascite.

Preparazione per un'ecografia e il corso della sua condotta

Questo studio non ha controindicazioni o restrizioni, in casi di emergenza viene effettuato senza preparazione preliminare del paziente. Una procedura pianificata richiede una migliore visualizzazione dei cambiamenti patologici negli organi. Si consiglia al paziente di escludere dalla dieta alimenti che contengono una grande quantità di fibre e che aumentano la formazione di gas 3 giorni prima dello studio.

Alla vigilia dello studio, bevi un lassativo o fai un clistere purificante. Per ridurre l'accumulo di gas nell'intestino il giorno dell'ecografia, è necessario assumere Mezim o carbone attivo. I moderni metodi di diagnostica ecografica possono determinare le aree più probabili di accumulo di liquido libero nella cavità addominale.

Ecco perché specialisti qualificati esaminano le seguenti aree anatomiche:

Il "pavimento" superiore del peritoneo, che si trova sotto il diaframma. Di particolare valore diagnostico sono gli spazi situati sotto il fegato e formati dalla sezione principale dell'intestino tenue - le parti ascendenti e discendenti del colon. Normalmente, i cosiddetti canali laterali non esistono: il tegumento del peritoneo è strettamente attaccato all'intestino.
La piccola pelvi, in cui, con lo sviluppo di processi patologici, può accumularsi il versamento, che scorre dai canali laterali.

Le caratteristiche fisiche dell'umidità accumulata nel peritoneo per qualsiasi motivo non consentono il riflesso dell'onda ultrasonica, questo fenomeno rende l'iter diagnostico il più informativo possibile. La presenza di versamento negli spazi anatomici esaminati crea un oscuro fuoco in movimento sul monitor dell'apparato. In assenza di liquido libero, la diagnosi non richiede più di 5 minuti.

Per rilevare l'umidità in eccesso, la sonda ecografica viene spostata lungo le linee ascellari anteriore e media su entrambi i lati del corpo del paziente lungo l'addome

Se il trasudato non può essere rilevato, segni indiretti possono indicare la sua presenza:

spostamento delle anse del colon;
cambiamento del suono durante le percussioni (maschiatura) - timpanico nel peritoneo superiore, opaco in quello inferiore.

Tipi di idropisia addominale mediante ultrasuoni

La classificazione internazionale delle malattie non distingue l'ascite come una malattia separata: questa condizione è una complicazione delle ultime fasi di altri processi patologici. In base alla luminosità dei sintomi clinici, si distinguono le seguenti forme di ascite:

iniziale: la quantità di acqua accumulata all'interno dell'addome raggiunge 1,5 litri;
con una moderata quantità di liquido - manifestato da gonfiore delle gambe, un notevole aumento delle dimensioni del torace, mancanza di respiro, bruciore di stomaco, costipazione, sensazione di pesantezza all'addome;
massiccio (il volume di versamento è superiore a cinque litri) è una condizione pericolosa caratterizzata da tensione nelle pareti della cavità addominale, sviluppo di insufficienza della funzione dei sistemi cardiaco e respiratorio e infezione del trasudato.

Nella valutazione batteriologica della qualità del liquido libero, prodotto in speciali condizioni di laboratorio, si distingue tra idropisia sterile (assenza di microrganismi patogeni) e infetta (presenza di microbi patogeni).

Secondo le previsioni diagnostiche, c'è l'ascite, che è suscettibile di terapia farmacologica, e una condizione patologica stabile (la sua ricomparsa o non suscettibile di trattamento).

Cosa si fa dopo aver confermato la patologia con gli ultrasuoni?

Il corso del trattamento dipende da quale malattia ha causato l'accumulo di umidità in eccesso nel peritoneo. Per diagnosticare con precisione il processo patologico, gli specialisti praticanti conducono un esame completo del paziente, tra cui:

analisi biochimiche e cliniche generali del sangue e delle urine;
ricerca su marker oncologici e indicatori del metabolismo elettrolitico;
radiografia del sondaggio del torace e delle cavità addominali;
coagulogramma - valutazione dei parametri del sistema di coagulazione;
angiografia dei vasi sanguigni, che consente di valutare le loro condizioni;
Risonanza magnetica o TC dell'addome;
epatoscintigrafia: una tecnica moderna per esaminare il fegato utilizzando una gamma camera, che consente di visualizzare un organo;
laparoscopia diagnostica con puntura medica di liquido ascitico.

Per pompare il trasudato dalla cavità addominale, viene utilizzato il metodo della laparocentesi terapeutica: viene praticata una puntura nella parete anteriore dell'addome, attraverso la quale viene rimosso il liquido in eccesso

Si raccomanda ai pazienti con cirrosi epatica di sottoporsi a uno shunt portosistemico intraepatico, la cui tecnica consiste nel posizionare uno stent in rete metallica per creare una connessione artificiale tra il colletto e le vene epatiche. Nei casi più gravi è necessario il trapianto di organi.

In conclusione delle informazioni di cui sopra, vorrei sottolineare ancora una volta che l'accumulo di liquido libero nella cavità addominale è considerato una manifestazione sfavorevole del complicato decorso del disturbo sottostante. Lo sviluppo dell'ascite può provocare una violazione dell'attività funzionale del cuore e della milza, emorragia interna, peritonite, edema cerebrale.

Il tasso di mortalità dei pazienti con massiccia idropisia addominale raggiunge il 50%. Le misure che prevengono il verificarsi di questa condizione patologica consistono nel trattamento tempestivo dei processi infettivi e infiammatori, una corretta alimentazione, il rifiuto di bere alcolici, sport moderati, esami preventivi da parte di medici specialisti e l'esatta attuazione delle loro raccomandazioni.

Rilevanza. Qualsiasi trauma chirurgico sul peritoneo è un fattore di stress e l'adesione è una delle complicanze più frequenti. I cambiamenti citologici nel liquido peritoneale esercitano una certa influenza su questo processo, il cui studio consentirà di proporre nuovi approcci alla sua controllabilità non solo durante le operazioni pianificate, ma anche in condizioni estreme.

Scopo dello studio. Studiare i cambiamenti citologici nel fluido peritoneale nella dinamica dello stress operativo.

Materiale e metodi. Lo studio ha coinvolto 60 ratti all'età di 3 mesi, raggiungendo una massa di 250-300 g, a cui sono stati inflitti un trauma chirurgico standard. Lo studio della composizione cellulare del fluido peritoneale nel processo di adesiogenesi è stato condotto su animali da esperimento. Per fare ciò, entro 5 giorni prima dell'applicazione della lesione operatoria ea giorni alterni per 30 giorni nel periodo postoperatorio, è stato prelevato il liquido peritoneale con il suo successivo esame citologico. Durante l'assunzione di liquido peritoneale, l'animale è stato preliminarmente fissato in un dispositivo sviluppato e brevettato (brevetto RF n. 72405, registrato il 20.04.2008.). L'assunzione di liquido peritoneale comprendeva le seguenti fasi: laparolifting della parete addominale anteriore utilizzando gli elementi del dispositivo proposto, assunzione di liquido peritoneale utilizzando il dispositivo sviluppato per la puntura della cavità addominale (brevetto RF n. 89954, registrato il 02.12.09 ). Il materiale per l'esame citologico è stato centrifugato, il surnatante è stato rimosso e sono stati fatti strisci dalla sospensione risultante. Gli strisci sono stati colorati con il metodo Romanovsky-Giemsa e sottoposti ad analisi citologica mediante microscopia ottica.

Il livello di adesione è stato studiato su 90 ratti. In tre (30 animali ciascuno) dei gruppi precedentemente descritti, il livello di aderenze è stato calcolato nella dinamica del trauma chirurgico al 10 °, 20 ° e 30 ° giorno (l'ultimo periodo ha caratterizzato il tempo della formazione finale delle aderenze peritoneali). A tale scopo, dopo la recidiva, è stata rivista la cavità addominale ed è stato determinato il tipo morfologico di ciascuna adesione rilevata.

Il calcolo del livello del processo adesivo è stato effettuato in numeri assoluti utilizzando una formula matematica precedentemente sviluppata e brevettata. I risultati sono stati elaborati utilizzando metodi statistici standard.

Risultati. L'esame citologico del liquido peritoneale negli strisci preparati di tutti i gruppi sperimentali ha rivelato i seguenti elementi cellulari: eritrociti, linfociti, leucociti, eosinofili, leucociti segmentati, monociti, mesotelio; i macrofagi e le cellule simili ai fibroblasti erano meno comuni. Il quadro citologico del liquido peritoneale aveva una chiara relazione con il volume del trauma chirurgico e dei disturbi funzionali del peritoneo.

La composizione cellulare del liquido peritoneale nel gruppo con trauma chirurgico standard è stata caratterizzata dalle seguenti modifiche: il numero di eritrociti è stato ripristinato entro il 10 ° giorno dopo il trauma chirurgico. I leucociti sono diminuiti entro 3-5 giorni dall'operazione con l'instaurazione di un livello medio normale di leucociti entro 9 giorni; le cellule della serie monocitica-macrofagi sono aumentate solo nell'8-10 ° giorno; un aumento relativamente piccolo del numero di linfociti è stato notato nei primi 5-7 giorni dopo l'intervento.

Al 10 ° giorno dopo l'applicazione di una lesione chirurgica standard, l'USP calcolato era 0,31 ± 0,01 cm3, con un aumento del periodo, l'USP tendeva ad aumentare, raggiungendo 0,34 ± 0,02 cm3 entro il giorno 20 e entro 30 giorni. - 0,36 ± 0,01 cm3.

Risultati. La composizione cellulare del fluido peritoneale dipende direttamente dal volume della lesione chirurgica, mentre la stabilità della qualità della composizione cellulare del fluido peritoneale è accompagnata da una variazione della sua quantità nella dinamica della risposta rigenerativa del peritoneo . Il ripristino del carattere iniziale della componente citologica del liquido peritoneale entro 15-23 giorni non garantisce la stabilizzazione dell'adesiogenesi, che dura fino a 30 giorni.

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T.P. Starovoitova, T.A. Ivanova, G.B. Mukhturgin, S.A. Vityazeva, V.I. Dubrovin,

K.M. Korytov, S.V. Balakhonov

CAMBIAMENTI NELLA COMPOSIZIONE CELLULARE DEL FLUIDO PERITONEALE NEI TOPI BIANCHI DURANTE UN PROCESSO INFETTIVO CAUSATO DA YERSINIA PESTIS CON DIVERSA COMPOSIZIONE PLASMIDICA

Irkutsk Scientific Research Anti-Plague Institute of Siberia and the Far East (Irkutsk)

L'articolo presenta dati sull'effetto della composizione plasmidica del microbo della peste sulla composizione della sottopopolazione delle cellule mononucleate del liquido peritoneale di topi bianchi nelle prime fasi del processo infettivo. È stato dimostrato che i cambiamenti nella composizione cellulare del fluido peritoneale negli animali da esperimento dipendono dal profilo plasmidico dei ceppi di microbi della peste. Nel corso dell'esperimento è stata rilevata anche una fase nella variazione della composizione quantitativa dei mastociti del fluido peritoneale di topi bianchi infettati da ceppi di Yersinia pestis con diverso spettro plasmidico. Parole chiave: Yersinia pestis, fluido peritoneale, virulenza

CAMBIAMENTI DEI COMPONENTI CELLULARI DEL FLUIDO PERITONEALE DEI TOPI BIANCHI CON INFEZIONE CAUSATA DA YERSINIA PESTIS CON DIVERSO PROFILO PLASMIDICO

T.P. Starovoytova, T.A. Ivanova, G.B. Mukhturgin, S.A. Vityazeva, V.I. Dubrovina,

K.M. Korytov, S.V. Balakhonov

Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East, Irkutsk

L'articolo presenta i dati sull'influenza del profilo plasmidico di Yersinia pestis sulla struttura della sottopopolazione delle cellule mononucleate del liquido peritoneale dei topi nelle prime fasi del processo infettivo. È stato dimostrato che il cambiamento della composizione cellulare del fluido peritoneale degli animali da esperimento dipendeva dal profilo plasmidico dei ceppi di Yersinia pestis. È stato determinato il carattere di fase nei cambiamenti della composizione quantitativa dei mastociti del fluido peritoneale di topi bianchi infettati con ceppi di Y. pestis con diverso spettro plasmidico. Parole chiave: Yersinia pestis, fluido peritoneale, virulenza

La stragrande maggioranza dei fattori di virulenza di Yersinia pestis è associata alla composizione del plasmide. Il genoma dell'agente eziologico della peste della principale sottospecie - Yersinia pestis sottospecie pestis - ha tre plasmidi - pYU (45MDa), pYP (6MN) e pYT (61MDa), il loro ruolo è ben studiato nell'implementazione delle proprietà patogene di Yersinia . Con la presenza del plasmide pYV, i ceppi di Yersinia mostrano molte caratteristiche fenotipiche: adesione cellulare, autoagglutinazione, agglutinazione superficiale, nonché la sintesi delle proteine \u200b\u200bdella membrana esterna, inclusi gli antigeni V e W e altre proteine, la cui azione è mirata alla soppressione l'attività fagocitica dei sistemi delle cellule immunitarie. I plasmidi pYP e pYT sono specie-specifici. Il plasmide рYP determina la sintesi della batteriocina, la pesticina 1 e l'attivatore del plasminogeno, mentre il plasmide рYТ codifica i due fattori di virulenza più studiati: la tossina murina e le capsule F1. Una caratteristica distintiva dell'agente patogeno circolante nel focus tuviniano è la presenza nel suo genoma di un ulteriore quarto plasmide pTRZZ con funzioni ancora poco chiare. Si presume che questo plasmide sia una versione geneticamente modificata del plasmide residente da 9,5 kD che trasporta i geni pla (attivatore del plasminogeno) e pstl (pesticina 1). La perdita di plasmide porta a un cambiamento nelle proprietà biochimiche e culturali, nonché a una diminuzione o completa perdita della virulenza dell'agente patogeno.

Il principale segno clinico di infezione da peste e intossicazione, che determina la gravità del decorso

e l'esito della malattia è una violazione dell'omeostasi del macroorganismo. Gli obiettivi primari dell'endotossina sono leucociti polimorfonucleati, macrofagi, monociti, cellule endoteliali e altri elementi cellulari. I cambiamenti nella composizione cellulare del liquido peritoneale possono essere considerati un criterio diagnostico per la gravità della malattia in molte malattie, compresa la peste. A questo proposito, è di grande interesse la valutazione della composizione cellulare quantitativa e qualitativa del fluido peritoneale nei topi bianchi durante il processo infettivo causato da Y. pestis con diversa composizione plasmidica.

Scopo del lavoro: indagare la dinamica dei cambiamenti nella composizione della sottopopolazione delle cellule mononucleate del liquido peritoneale di topi bianchi nelle prime fasi dell'infezione da peste sperimentale.

MATERIALI E METODI

Il modello sperimentale negli esperimenti era di 175 topi bianchi di entrambi i sessi, ma standard in termini di condizioni e peso (18-20 g). Gli animali sono stati portati fuori dall'esperimento in conformità con le "Regole di pratica di laboratorio nella Federazione Russa" approvate dall'Ordine del Ministero della Salute della Federazione Russa n. 267 del 19 giugno 2003 e lo Standard Nazionale del Federazione Russa GOST R 53434-2009 "Principi di buona pratica di laboratorio".

Sei ceppi di Y. pestis subsp. pestis e Y. pestis subsp. altaica dalla collezione dell'Ir-

Tabella 1

Caratteristiche dei ceppi testati del microbo della peste

Ceppo Luogo di isolamento Composizione plasmidica Virulenza per topi bianchi (Obo), m.

Y. pestis subsp. pestis I-2638 Tuvan natural plague focus pYP + pYV + pTP33 + pYT + 10 / altamente virulento

Y. pestis subsp. pestis I-3479 Irkutsk Anti-Plague Institute pYP + pYV-pTP33 + pYT + avirulent

Y. pestis subsp. pestis I-3480 Irkutsk Anti-Plague Institute pYP-pYV-pTP33 + pYT + avirulent

Y. pestis subsp. altaica I-2359 Gorno-Altai focolaio della peste naturale pYP + pYV + pYT + 4 x 104 / leggermente virulento

Y. pestis subsp. altaica I-2948 Gorno-Altai focolaio della peste naturale pYP-pYV + pYT + 3 x 108 / virulenza residua

Y. pestis subsp. altaica I-2948/3 Irkutsk Anti-Plague Institute pYP-pYV-pYT + avirulent

istituto anti-peste di ricerca Kutsk di Rospotrebnadzor (Tabella 1).

I topi bianchi intatti sono stati divisi in 6 gruppi sperimentali e 1 di controllo di 25 animali ciascuno. Gli animali dei gruppi sperimentali sono stati infettati con Y. pestis ad una concentrazione di 1 x 106 mc in un volume di 0,5 ml mediante metodo intraperitoneale. Agli animali del gruppo sperimentale I è stata iniettata una coltura di due giorni di Y. pestis subsp. pestis I-2638, gruppo II - Y. pestis subsp. pestis I-3479, gruppo III - Y. pestis subsp. pestis I-3480, gruppo sperimentale IV di animali sono stati infettati con il ceppo di riferimento Gorno-Altai Y pestis subsp. altaica I-2359, gruppo V - Y. pestis subsp. altaica I-2948, gruppo VI - dal ceppo di selezione Y. pestis subsp. altaica I-2948/3.

Il campionamento del materiale da animali da esperimento (fluido peritoneale) è stato effettuato dopo 30, 60, 90, 120 e 180 minuti. Il numero totale di cellule nucleari in 1 ml di fluido peritoneale è stato contato in preparazioni fisse colorate con metodi standard. Per l'analisi batteriologica, il sangue del cuore e del liquido peritoneale (0,1 ml ciascuno) sono stati inoculati su un mezzo nutritivo solido (agar di Hottinger, pH 7,2).

Abbiamo utilizzato i metodi della microscopia di indagine. La valutazione quantitativa del numero totale di leucociti è stata effettuata utilizzando un metodo di conteggio cellulare unificato in una camera di Goryaev. La percentuale di diversi tipi di leucociti è stata effettuata con il metodo dell'esame morfologico del liquido peritoneale negli strisci. Nello studio dei preparati utilizzando il programma per computer "MoticImagesPlus" (versione 2), è stato effettuato il conteggio differenziale dei basofili tissutali (TC), misurandone il diametro e l'area. Il grado di attivazione MC è stato valutato dall'indice di degranulazione cellulare (IDTC), il rapporto percentuale tra i basofili obesi degranulati e il loro numero totale.

L'analisi automatica dell'immagine è stata eseguita utilizzando un microscopio ottico "Zeiss" (Germania) con una videocamera "Moticam 2000", risoluzione 1392 x 1040 pixel, ca. 10, vol. 100.

La significatività dei risultati della ricerca è stata ottenuta con metodi matematici di elaborazione statistica utilizzando l'analisi comparativa del test t di Student e utilizzando il programma per computer Statistica, versione 6.0 (StatSoft Inc. 19842001, IPCHI 31415926535897) e il pacchetto software

Microsoft Office Excel (2003). I risultati sono stati considerati significativi in \u200b\u200brelazione al controllo a pag< 0,05.

RISULTATI E DISCUSSIONE

Il numero totale di cellule nel liquido peritoneale in animali intatti è 4,3 ± 0,9 x 103 in 1 cm3, mentre i macrofagi sono il tipo cellulare predominante e rappresentano il 60,5 ± 5,6% del numero totale di cellule, mentre i linfociti rappresentano 17,0 ± 2,8 %; Il 5,5 ± 0,8% sono cellule mesoteliali e altri elementi cellulari.

Nei topi bianchi infetti, la fasicità è osservata nella variazione del numero totale di cellule nucleari. Negli animali infettati dal virulento Y. pestis subsp. pestis I-2638, dopo 30 minuti il \u200b\u200bnumero totale di cellule nucleari aumenta bruscamente a 1,5 ± 0,4 x 104 per 1 cm3, che è 3,4 volte superiore a quello degli animali intatti. Entro 60 minuti dello studio, gli indicatori diminuiscono a valori intatti, continuando a diminuire nei periodi successivi. Il quadro citologico del liquido peritoneale ha una chiara relazione con la coltura infettante. Negli animali del gruppo I, 30 minuti dopo l'infezione, è stato notato un aumento del numero di linfociti, superando il valore negli animali intatti di 4 volte a causa di una forte diminuzione del numero di monociti. Questi cambiamenti sono stati rivelati in tutti i periodi di osservazione. Nel liquido peritoneale di topi bianchi infettati da Y. pestis subsp. pestis I-2638, dopo 120 min dall'inizio dell'esperimento, è stato registrato un aumento del numero di neutrofili segmentati di 2,5 volte, rispetto al controllo (p< 0,05), и незначительное увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов. На последнем сроке исследования в мазках перитонеальной жидкости выявляется большое количество фибробластов, агрегация лимфоцитов и большое количество делящихся клеток.

Nei topi bianchi infettati da Y. pestis subsp. altaica I-2359, Y. pestis subsp. pestis I-3479 e Y. pestis subsp. altaica I-2948/3, non ci sono state variazioni statisticamente significative 30 minuti dopo l'inizio dell'esperimento. Entro 180 min, il numero di cellule nucleari nell'essudato peritoneale supera i valori di controllo di 2,8 (p< 0,01), 1,9 (р < 0,05) и 1,5 раза соответственно. При введении животным Y. pestis subsp. pestis И-3480 и Y. pestis subsp. altaica И-2948 через 30 мин отмечается повышение общего числа ядерных клеток с последующим снижением (120 мин) до уровня контроля, и к 180 мин показатель вновь увеличивается.

Quando si esaminano strisci di liquido peritoneale in animali di tutti i gruppi sperimentali, viene registrata la proliferazione cellulare di linfociti, istiociti, un aumento di eosinofili, basofili tissutali, plasmociti, cellule del mesotelio e fibroblasti.

La valutazione delle proprietà morfologiche dei basofili, il loro numero e l'attività funzionale sono di interesse per lo studio della composizione cellulare del fluido peritoneale di animali infetti.

È stato riscontrato che nei topi bianchi sperimentali esiste un carattere fasico nel cambiamento nella composizione quantitativa dei basofili tissutali del fluido peritoneale. Un aumento del loro numero negli animali infettati da Y. pestis subsp. pestis I-2638, viene registrato 60 minuti dopo l'introduzione della coltura, superando i valori in animali intatti di 2,6 volte (p< 0,05). Затем данные показатели снижаются (90-120 мин) до значений ин-тактных животных, к 180 мин вновь возрастают, достигая значений 8,5 против 2,5 в контроле (р < 0,05). Часть ТК представлены интестинальными - незрелыми формами (рис. 1), появление которых можно расценивать как процесс компенсации.

Figura: 1. Topo bianco infettato da Y. pestis subsp. pestis I-2638. Liquido peritoneale. Mastociti intestinali. La colorazione secondo Romanovsky - Giemsa, uv. x 100.

Nei primi termini dello studio, i MC atipici costituiscono il 21,0 ± 1,8% del numero totale di MC; negli ultimi termini, questi indicatori aumentano al 25,2 ± 2,1%. I TC atipici hanno un potenziale funzionale minimo e sono molto più piccoli. Il diametro della cella è 6,8-8,6 μm, che in media è 2,3 volte inferiore (p< 0,05), по сравнению с диаметром типичных ТК. Таких клеток значительно меньше в перитонеальной жидкости белых мышей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2359, и только в период 120-180 мин после заражения отмечаются единичные интестинальные тканевые базофилы. У животных других опытных групп атипичные ТК не выявляются.

In generale, l'attivazione del sistema MC riflette la ristrutturazione adattativa generale del corpo in risposta all'introduzione dell'antigene. La degradazione dei basofili tissutali segue il percorso dell'esocitosi granulare intero (Fig. 2). L'attività funzionale dei basofili tissutali del fluido peritoneale di animali da esperimento ha un carattere di fase. Si osserva l'IDTC più alto

nei topi bianchi 60 min dopo l'infezione da Y. pestis subsp. pestis I-2638 - 3,9 ± 0,6, che è 18,5 volte (p< 0,01) выше значения у интактных животных, затем показатель резко снижается, но к 180 мин исследований он вновь повышается, превышая значение в контрольной группе в 4,4 раза (р < 0,01). У селекционных клонов Y. pestis subsp. pestis И-3479 и И-3480 максимальное значение индекса дегрануляции имеет место через 90 мин от начала опыта и составляет 2,0 ± 0,3 и 1,3 ± 0,4 соответственно, при этом у белых мышей II опытной группы показатели во все сроки исследования были выше, чем у животных III опытной группы.

Figura: 2. Topo bianco infettato da Y. pestis subsp. pestis I-2638. Liquido peritoneale. Mastociti. Degranulazione. La colorazione secondo Romanovsky - Giemsa, uv. x 100.

Il carattere di fase più pronunciato dei cambiamenti nei basofili tissutali è osservato nei topi bianchi del gruppo sperimentale IV. Il valore IDTC massimo cade nella seconda e quarta fase dello studio, superando i valori degli animali integri di 5,8 e 7,4 volte (p< 0,05) соответственно. У особей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2948/3, только на двух сроках исследования (60-90 мин) регистрируется увеличение дегрануляции тучных клеток в 3,6 и 2,6 раза соответственно (р < 0,05), в другие сроки данные статистически не значимы. У белых мышей V опытной группы максимальное значение ИДТК приходится на второй и последний срок исследования - 0,99 и 0,92 у. е., при в контроле отмечается 0,21 у. е.

CONCLUSIONE

Pertanto, lo sviluppo del processo infettivo nelle prime ore dopo l'inoculazione dell'agente patogeno della peste dipende dal suo profilo plasmidico, poiché i cambiamenti più pronunciati nella composizione cellulare quantitativa e qualitativa del liquido peritoneale sono stati trovati in animali da esperimento dopo infezione con ceppi con pYP + pYV + pYT +.

La fasicità rilevata durante l'esperimento nella variazione della composizione quantitativa dei mastociti del fluido peritoneale, soprattutto in soggetti infettati dal ceppo virulento di Y. pestis subsp. pestis I-2638 (pYP + pYV + pTP33 + pYT +), così come la presenza di forme immature e atipiche di MC indica lo sviluppo di processi di compensazione.

In generale, l'attivazione del sistema dei mastociti riflette la ristrutturazione adattativa generale del corpo in risposta all'introduzione dell'antigene.

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Il normale fluido sieroso della cavità addominale è limpido e giallo chiaro, il volume è inferiore a 50 ml. Se il liquido nella cavità addominale si accumula in quantità significative, si chiama ascitico. Ascite - idropisia addominale, idropisia dell'addome, accumulo significativo di liquido libero (solitamente trasudato) nella cavità addominale. L'ascite può manifestarsi improvvisamente (ad esempio con trombosi della vena porta) o svilupparsi gradualmente, nell'arco di diversi mesi, accompagnata da flatulenza, che può inizialmente dominare il quadro clinico. A volte nella cavità peritoneale si accumulano da 8 a 30 litri di liquido ascitico. All'esame obiettivo del paziente, l'ascite può essere riconosciuta se c'è almeno 1 litro di liquido nella cavità peritoneale.

OTTENIMENTO E LAVORAZIONE DI MATERIALE PER RICERCA DI LABORATORIO
Il fluido sieroso della cavità addominale si ottiene mediante puntura della cavità rettale-uterina (spazio di Douglas, tasca) (culldocentesi), mediante puntura percutanea (paracentesi) o mediante laparoscopia.

Allo stesso tempo, devono essere prelevati 5 ml di sangue venoso per determinare il gradiente "siero-ascite fluido" per l'albumina e altri parametri biochimici.

Si consiglia di eseguire l'esame citologico del liquido ascitico immediatamente dopo che il campione è stato consegnato al laboratorio. Se un'analisi di emergenza è impossibile, il campione deve essere conservato in frigorifero per non più di 12 ore utilizzando eparina o citrato di sodio come anticoagulante.

VALORE CLINICO E DIAGNOSTICO DEL CAMBIAMENTO DEGLI INDICATORI DI LIQUIDO GRAVE NELLA CAVITÀ ADDOMINALE
I compiti principali dell'analisi di laboratorio del fluido ascitico sono:
stabilire la natura benigna o maligna del versamento;
differenziazione della non infezione / infezione del fluido.

L'ascite nell'ipertensione portale, nel carcinoma epatocellulare e nelle metastasi epatiche senza diffonderle lungo il peritoneo è un trasudato.

L'ascite nelle malattie del fegato, nei casi di pancreatite, tubercolosi peritoneale e nei tumori maligni con metastasi nel peritoneo è, di regola, il risultato dell'essudato.

Sono stati sviluppati appropriati criteri di laboratorio per la diagnosi differenziale dei tipi di ascite portale e maligni (metastasi peritoneali). I principali indicatori di laboratorio della separazione dell'ascite in essudato e trasudato in assenza di cellule maligne sono il contenuto di albumina, i livelli di colesterolo e fibronectina. Il trasudato è caratterizzato da un elevato gradiente di albumina tra siero e fluido ascitico (\u003e 11 g / L), per l'essudato invece il fluido ascitico contiene una grande quantità di albumina e il gradiente per albumina tra fluido ascitico e siero è insignificante (
Nel caso del fluido ascitico chilo, vengono mostrati la determinazione dei trigliceridi in esso contenuti e l'impostazione dell'elettroforesi delle lipoproteine. Il livello di antigene cancro-embrionale superiore a 2,5 μg / L di liquido ascitico ha un'elevata specificità clinica e valore prognostico, vicino al 100% per un tumore con metastasi nel peritoneo.

Quando si esaminano i campioni di albumina, siero e liquido ascitico devono essere prelevati contemporaneamente. La concentrazione di albumina nel liquido ascitico deve essere determinata mediante metodi immunonefelometrici o immunoturbidimetrici. La determinazione fotometrica dell'albumina con il verde di bromcresolo fornisce risultati sovrastimati a una concentrazione di albumina superiore a 7 g / L; pertanto, questo metodo non è adatto per determinare il gradiente di albumina. Il livello proteico totale superiore a 30 g / l per la diagnosi di trasudato ha una specificità diagnostica dell'86% e una specificità diagnostica dell'83%.

Il conteggio e la differenziazione delle cellule per la determinazione dei granulociti neutrofili viene effettuato in fluido ascitico EDTA. Se c'è sangue nel campione, è necessario determinare:
il rapporto tra eritrociti e leucociti per valutare la possibilità di sanguinamento dal tratto gastrointestinale o una miscela di sangue "da viaggio";
il contenuto di leucociti (il loro numero relativo elevato indica un processo infiammatorio);
il contenuto di granulociti neutrofili (l'ascite con una predominanza e un contenuto assoluto di neutrofili superiore a 250 / μl è classificato come infettivo).

Se l'esame citologico non può essere eseguito entro 12 ore, il campione può essere conservato in frigorifero per un massimo di 2 giorni, ma il materiale deve essere fissato aggiungendo il 50% di alcol in un rapporto 1: 1.
La determinazione della microflora patogena nel liquido ascitico viene effettuata allo stesso modo del sangue - mediante coltivazione in condizioni aerobiche e anaerobiche.

PROPRIETÀ GENERALI (LIQUIDO MACROSCOPICO)
Il fluido ascitico (peritoneale) per sua natura è più spesso sieroso, meno spesso emorragico, chilo, mucoso. Leggero, trasparente o con una sfumatura giallastra, il fluido ascitico è più spesso un trasudato. Il liquido sieroso torbido è caratteristico della peritonite, che si manifesta come complicanza di appendicite, pancreatite, ostruzione intestinale e infezione batterica primaria. Colore verdastro, la colorazione della bile si verifica con perforazione della cistifellea, bulbo duodenale, intestino tenue, nonché con colecistite, pancreatite acuta. Il fluido ascitico acquisisce un colore verdastro quando la concentrazione di bilirubina in esso supera i 100 μmol / l. Se la concentrazione di bilirubina nel liquido ascitico è più alta che nel siero, questo è segno di perforazione del dotto biliare o della vescica. L'aspetto lattiginoso del fluido sieroso (versamento chiloso) appare quando c'è un gran numero di chilomicroni nel fluido ascitico. Ciò accade più spesso con danni o ostruzioni del dotto linfatico toracico causati da tubercolosi, cirrosi epatica e può verificarsi con leucemia (linfoma). Possibile infusione pseudocilosa con introduzione di grandi volumi di sostituti del sangue al paziente.

Il liquido sieroso emorragico della cavità addominale può comparire con trauma addominale con rottura degli organi interni, in particolare, con una rottura della tuba di Falloppio durante una gravidanza extrauterina, nonché con la diffusione di un tumore maligno lungo la membrana sierosa. Il liquido ha un colore scarlatto con una mescolanza di sangue "da viaggio" durante la paracentesi. Il liquido ascitico acquisisce un colore marrone a seguito di sanguinamento nella cavità addominale con peritonite tubercolare, metastasi nel peritoneo e dopo lesioni traumatiche degli organi addominali. Nella valutazione integrale delle condizioni dei pazienti con peritonite, viene utilizzato l'indice peritoneale di Mannheim, nel calcolo di quale uno degli indicatori più significativi è la natura dell'essudato

INDICATORI BIOCHIMICI
I seguenti fattori influenzano principalmente la concentrazione delle proteine \u200b\u200btotali nel fluido ascitico:
la concentrazione di proteine \u200b\u200btotali nel siero, con la quale il livello di proteine \u200b\u200bnel fluido ascitico ha una relazione diretta;
il livello di ipertensione portale, con cui esiste una relazione inversa. Inoltre, la concentrazione di proteine \u200b\u200btotali nel fluido ascitico è influenzata da
prendendo diuretici.

Le indicazioni per la determinazione delle proteine \u200b\u200btotali nel liquido ascitico sono:
antibiotici profilattici per prevenire la peritonite batterica;
diagnosi differenziale di peritonite batterica primaria e secondaria (introdotta);
ascite nell'insufficienza cardiaca.

Proteine \u200b\u200btotali
Ad un valore di soglia del contenuto proteico totale nel fluido ascitico di 25 g / l, le idee classiche sulla separazione di trasudato ed essudato sulla base della sudorazione proteica sono confermate solo dal 56%, cioè non hanno praticamente conferme di laboratorio . Ciò è dovuto al fatto che il contenuto proteico totale è basso nell'eziologia infettiva dell'ascite, sebbene la natura essudativa dell'ascite sia indiscutibile. D'altra parte, il contenuto proteico totale nel liquido ascitico è elevato nei pazienti con insufficienza cardiaca, in cui il liquido ascitico è considerato un trasudato.

Una concentrazione proteica totale superiore a 30 g / L indica un essudato con una sensibilità clinica del 93% e una specificità dell'85%. Un rapporto proteico superiore a -5 indica un essudato con una sensibilità clinica del 93%, una specificità dell'85%. Nell'ascite causata da tumori maligni, ad eccezione del carcinoma epatocellulare, la concentrazione proteica totale è di 49-65 g / l, mentre nella cirrosi epatica e nel carcinoma epatocellulare è compresa tra 17-21 g / l. I pazienti con cirrosi epatica e livelli di proteine \u200b\u200bnel liquido ascitico inferiori a 15 g / L hanno una prognosi sfavorevole. Un basso livello di proteine \u200b\u200bnel fluido ascitico è caratteristico della natura infettiva dell'ascite, allo stesso tempo, con un'infezione batterica secondaria e con peritonite tubercolare, un livello proteico superiore a 30 g / l è costantemente determinato nel fluido ascitico .

Albume
Il gradiente di albumina tra siero e liquido ascitico è determinato dal livello di ipertensione portale. I pazienti con un gradiente di albumina superiore a 11 g / L hanno ipertensione portale, mentre quelli con un gradiente inferiore a 11 g / L no. Nella cirrosi epatica con ipertensione portale, un gradiente di albumina superiore a 11 g / l ha una specificità clinica del 97%. L'ascite nei tipi misti - dovuta a cirrosi epatica e metastasi nel peritoneo o cirrosi epatica e peritonite tubercolare - sono anche accompagnate da un gradiente di albumina superiore a 11 g / l.

Nel distinguere il trasudato dall'essudato, il gradiente di albumina è più importante della proteina totale. Va tenuto presente che quando si usano diuretici o paracentesi, i livelli di albumina e proteine \u200b\u200btotali nel liquido ascitico cambiano.

Nei pazienti con peritonite avanzata, il grado di diminuzione della concentrazione sierica di albumina è un indicatore prognostico altamente informativo che consente di valutare la gravità della malattia e il rischio di un esito sfavorevole. Una diminuzione del livello di albumina nel sangue si verifica sia a causa di un aumento del catabolismo proteico, caratteristico della fase acuta di qualsiasi processo infiammatorio, sia a causa dell'essudazione nella cavità addominale. L'essudato peritoneale contiene una quantità significativa di proteine. Si ritiene che fino al 50% di tutto il fluido extracellulare nel corpo possa spostarsi nella cavità addominale. Con lo sviluppo dell'edema, inizialmente, il processo di assorbimento del fluido da parte del peritoneo accelera, ma poi, a causa di una violazione della microcircolazione, rallenta bruscamente: si verifica un accumulo di essudato. Una certa quantità di proteine, compresa l'albumina, rilasciata dal flusso sanguigno, viene persa nel corpo; un alto versamento proteico porta a ipoalbuminemia. Inoltre, c'è sempre un edema significativo del tessuto pre e retroperitoneale e di altri tessuti dovuto all'azione di sostanze biologicamente attive: enzimi, chinine, istamina, a causa delle quali l'albumina si deposita nei tessuti. Insieme a una diminuzione della sintesi (l'albumina è un reagente negativo della fase acuta dell'infiammazione) e un aumento del decadimento (predominanza dei processi catabolici nel corpo), il rilascio di albumina nella cavità addominale e la sua deposizione nei tessuti edematosi sono i motivo principale del fenomeno prognosticamente sfavorevole: una diminuzione della concentrazione di albumina nel siero del sangue.

La penetrazione dell'albumina dal sangue nel versamento è caratterizzata dal valore della concentrazione totale di albumina nel versamento. Nella maggior parte dei casi, la concentrazione totale di albumina nel versamento è in stretta correlazione con il valore della concentrazione totale di albumina nel versamento (la concentrazione di albumina nel siero). Nei casi in cui la concentrazione totale di albumina nel versamento è\u003e 34 g / L e la concentrazione totale di albumina nel versamento è significativamente inferiore alla concentrazione totale di albumina nel versamento, i pazienti hanno un decorso lieve del periodo postoperatorio; l'esito della malattia è favorevole; lo scarico attraverso il drenaggio è insignificante.

In caso di differenze significative nello stato di albumina nel versamento e nel siero, il valore della concentrazione totale di albumina nel versamento non è correlato alla concentrazione di albumina nel sangue; ovviamente, c'è un effetto proteolitico sull'albumina nell'essudato, che porta alla sua alterazione e distruzione. In altri casi, il valore assoluto della concentrazione totale di albumina nel versamento dipende dal valore della concentrazione totale di albumina nel versamento e non dall'attività del processo infiammatorio nella cavità addominale. Per caratterizzare la gravità del processo infiammatorio nella cavità addominale, è adatto il rapporto tra la concentrazione totale di albumina nel versamento, che caratterizza il grado di permeabilità della parete vascolare per l'albumina. Il parametro della concentrazione totale di albumina nel versamento riflette la gravità delle condizioni del paziente e il parametro della concentrazione totale di albumina nel versamento riflette la gravità del processo infiammatorio nella cavità addominale.

Endotossina
Nei pazienti con peritonite fecale (perforazione del colon), la concentrazione di endotossina nel liquido peritoneale può raggiungere 1000 μg / L. Nella peritonite batterica diffusa, la concentrazione di endotossine è generalmente relativamente bassa. Se, nel periodo postoperatorio, la microflora del colon continua a entrare nella cavità addominale (aumenta l'endotossina nel liquido peritoneale), questa è una grande minaccia di peritonite diffusa e la morte del paziente.

Glucosio
Nella peritonite non batterica, il valore del rapporto glucosio-liquido ascitico / glucoplasma è superiore a 1; in caso di peritonite batterica, questo valore è inferiore a 1. La concentrazione di glucosio nel liquido ascitico è inferiore a 2,8 mmol / l è caratteristica della peritonite batterica. Nella maggior parte dei casi di peritonite tubercolare, la concentrazione di glucosio nel liquido ascitico è inferiore a 1,7 mmol / l. Si riduce anche nei tumori maligni con metastasi, che sono le cause dell'ascite.

STUDIO BATTERIOLOGICO
Quando il liquido peritoneale è infettato da una monocoltura, gli studi colturali hanno una sensibilità clinica superiore all'85-90%, mentre un indicatore come il contenuto di granulociti neutrofili / μl è superiore a 250 - solo il 50%. Studi batteriologici mostrano che nel 70% dei casi è presente una microflora gram-negativa, solitamente E. coli, nel 20% dei casi - gram-positiva.

Il significato eziologico dei microrganismi anaerobici è stato dimostrato in tutte le infezioni intra-addominali complicate, dove fanno parte di associazioni polimicrobiche. Clostridium perfringens e Clostridium septicum sono coinvolti nello sviluppo di peritonite secondaria, ascesso intra-addominale e sepsi nella perforazione del colon e dell'ileo terminale. Con i tumori del colon complicati, il 70-85% dei pazienti ha una batteriemia dovuta a Clostridium septicum. Nell'appendicite, Bilophila wadsworthia viene escreta dal versamento. Le infezioni miste spesso coinvolgono Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp. Che si verificano nel 90-95% dei casi, Actinomyces spp., Prevotella spp., Lactobacillus spp., Fusobacterium spp. il più difficile nella diagnosi e nel trattamento degli ascessi epatici actinomicotici. I batteri, principalmente Bacteroides fragilis e Bacteroides thetaiotaomicron, sono di primaria importanza nelle infezioni intra-addominali. La frequenza di isolamento di Bacteroides fragilis nella peritonite secondaria raggiunge il 22,8-44,5%. Esistono prove del significato eziologico degli anaerobi nella peritonite primaria. Clostridium perfringens e Bacteroides fragilis sono escreti in tutti i pazienti con infezioni delle vie biliari con segni di ipertensione biliare o endoprotesi che forniscono una pervietà del dotto biliare comune. Nella pancreatite, batteroidi e clostridi sono isolati tra i patogeni nel 5-14% dei casi. Nell'infezione intra-addominale nosocomiale, l'associazione di enterobatteri multiresistenti, Pseudomonas aeruginosa, enterococchi e anaerobi è significativa. Le infezioni delle ferite nei pazienti dopo interventi addominali nel 3,9% sono state causate da Bacteroides spp., Nell'1,1% - da Clostridium perfringens. Lo sviluppo di peritonite e mortalità nelle infezioni intra-addominali sono dovute agli aerobi gram-negativi e la formazione di ascessi intra-addominali nei sopravvissuti è dovuta alla microflora anaerobica.

Un processo microbico-infiammatorio progressivo nella cavità addominale (sullo sfondo di una lesione operatoria, una diminuzione della resistenza del corpo, ecc.) Procede molto rapidamente e entro 4-5 giorni può raggiungere uno stadio che richiede un intervento chirurgico. Il dinamismo del processo, l'elevata probabilità di reinfezione, lo sviluppo della resistenza alla microflora richiedono sia la prescrizione empirica della terapia antibatterica contemporaneamente ad un'analisi microbiologica rapida indicativa (microscopia, gascromatografia) sia una valutazione della sensibilità dei microrganismi nel materiale clinico mediante dischi con antibiotici e monitoraggio costante della situazione batteriologica al centro dell'infiammazione. Il metodo colturale batteriologico di routine consente di ottenere il risultato 24-72 ore dopo l'inizio dello studio, rivelando la natura della microflora patogena, confermando la corretta scelta della terapia antibiotica o suggerendo la necessità della sua correzione. È necessario un monitoraggio microbiologico costante, poiché la situazione microbiologica al centro dell'infezione può cambiare in modo significativo durante il processo patologico e richiedere un cambiamento nella terapia.

STUDIO SANGUE
Eritrociti nel liquido ascitico EDTA
Il liquido di lavaggio peritoneale contiene meno di 25.000 eritrociti / μL. Nel liquido ascitico, gli eritrociti si accumulano dopo un trauma o sono una manifestazione di lesioni tubercolari o maligne del peritoneo. Un rapporto simile tra il numero di eritrociti e leucociti nel fluido ascitico e nel sangue indica una lesione iatrogena (sangue "da viaggio") o sanguinamento nella cavità addominale.

Leucociti
La determinazione dei leucociti nel liquido peritoneale può essere effettuata quantitativamente contando nella camera di Goryaev o semiquantitativamente utilizzando strisce diagnostiche utilizzando una zona di test per determinare i leucociti. La sensibilità della zona del test per i leucociti è di 3000 cellule / μl. La sensibilità diagnostica della rilevazione dei leucociti con il metodo "chimica secca" nel liquido peritoneale è dell'88%, la specificità è del 94%.

Il numero di leucociti nel liquido ascitico, il pH e la concentrazione di lattato durante l'infezione del liquido ascitico differiscono significativamente dai valori di questi indicatori nell'ascite sterile, tuttavia, tutti questi valori cambiano approssimativamente nello stesso tipo e non è possibile distinguere l'ascite da loro nel tumore e nella peritonite infettiva.

Il contenuto relativo di granulociti neutrofili di oltre il 25% della popolazione di leucociti del fluido ascitico è considerato patologico e caratteristico della peritonite batterica. Nei pazienti con cirrosi epatica, il numero di leucociti nel liquido ascitico è inversamente proporzionale al volume del liquido. Il numero di leucociti nel liquido ascitico aumenta con una diminuzione del volume di ascite a seguito del trattamento con diuretici, mentre il contenuto relativo di neutrofili nella formula dei leucociti non cambia.

Se la conta leucocitaria è superiore a 500 / μl, soprattutto se la conta dei granulociti è superiore a 250 / μl, c'è un'alta probabilità di peritonite batterica primaria. In questo caso, la specificità diagnostica della conferma di questa diagnosi è del 93%, la sensibilità è dell'84%. Nel cancro del pancreas e del cancro epatocellulare, c'è una leucocitosi moderata - 300-1000 / μl. Con la cirrosi alcolica, il numero di leucociti nel liquido ascitico sale a 1100-21.000 / μl.

La linfocitosi nel liquido ascitico è un segno di essudazione stagnante prolungata, infiammazione cronica, tubercolosi o processo tumorale. Nei pazienti con cirrosi epatica e liquido ascitico chiloso, il contenuto relativo di linfociti in esso contenuti va dal 12 al 96%, in media il 70%.

Marcatori tumorali
Antigene carboidrato 19-9
Nel liquido ascitico a un valore soglia (livello discriminante) di 30 U / ml, la sensibilità diagnostica di un tumore maligno è del 52% e la specificità diagnostica è del 100%.

Antigene embrionale canceroso
Lo studio dell'antigene cancro-embrionale nel liquido ascitico permette di distinguere tra malattie benigne e maligne con una specificità diagnostica e una sensibilità dell'83%. Con un valore soglia dell'antigene cancro-embrionale di 2,5 μg / ml, la sensibilità diagnostica è del 45%, la specificità diagnostica è del 100%. Se la determinazione dell'antigene cancro-embrionale nel liquido ascitico è combinata con uno studio per la presenza di cellule tumorali, la sensibilità diagnostica in caso di tumore maligno sale all'80%. Va notato che lo studio dell'antigene cancro-embrionale nel liquido ascitico è di scarso significato per la diagnosi di mesotelioma maligno diffuso: l'antigene cancro-embrionale è determinato solo nell'1-9% dei casi di questa patologia. Allo stesso tempo, l'antigene cancro-embrionale è determinato nell'80% dei casi di ascite associata a lesioni tumorali nel cancro dello stomaco, della mammella, del polmone.

STUDIO CITOLOGICO
La massima sensibilità analitica si ottiene durante lo studio citologico di preparati colorati secondo Pappenheim e Leishman e, se necessario, con ulteriori studi citochimici. La sensibilità diagnostica del rilevamento delle cellule tumorali al microscopio ottico è del 40-70%. Se è possibile ottenere cellule da 200 ml o più di liquido ascitico, la sensibilità diagnostica aumenta al 70-90% con una specificità diagnostica quasi del 100%. A volte la rilevazione in laboratorio delle cellule tumorali nel liquido ascitico precede la manifestazione clinica del tumore di 3 anni o più.

Nelle donne, le cellule tumorali nel liquido ascitico in ordine decrescente si trovano più spesso nei tumori del tratto genitale, in particolare nelle ovaie, quindi nel cancro al seno e nel tratto gastrointestinale. Negli uomini, la disseminazione lungo il peritoneo è più spesso determinata da tumori del tratto gastrointestinale, leucemia. In circa l'80% dei casi, il tumore appartiene all'adenocarcinoma. Tra i processi patologici che sono caratteristici delle lesioni del peritoneo e praticamente non si verificano nella pleura e nel pericardio, va notato lo pseudomixoma del peritoneo.

La sconfitta del peritoneo si osserva con un tumore mucinoso, il più delle volte un tumore mucinoso borderline dell'ovaio o del mucocele dell'appendice, nonché con adenocarcinoma mucinoso altamente differenziato dell'ovaio o dell'appendice. Si ritiene che la lesione possa svilupparsi con la rottura di un tumore cistico e la diffusione generalizzata di cellule tumorali nella cavità addominale. Allo stesso tempo, una grande quantità di muco si accumula nella cavità addominale, che è difficile da aspirare a causa della sua alta densità. I tamponi aspirati per lo pseudomixoma del peritoneo contengono una grande quantità di muco positivo resistente alla ialuronidasi. Le cellule tumorali, di regola, sono poche o non si trovano in diverse preparazioni, quindi, per stabilire una diagnosi, è spesso necessario esaminare diversi strisci o eseguire una seconda puntura.

Per stabilire la natura benigna o maligna della lesione, dovresti stare molto attento. In caso di lesioni benigne, le cellule di piccole dimensioni, con piccoli nuclei scuri, citoplasma moderatamente abbondante, i vacuoli sono contenuti nel citoplasma. Il muco contiene spesso fili di fibrociti. È impossibile trarre una conclusione su un processo maligno solo sulla base del rilevamento di una grande quantità di muco, poiché potrebbe essere il risultato della rottura del mucocele dell'appendice o del cistoadenoma ovarico mucinoso benigno. Particolare attenzione deve essere prestata nei casi in cui il muco di un tumore benigno è combinato con gruppi di cellule mesoteliali con cambiamenti reattivi. Per stabilire la natura della lesione, è necessario esaminare attentamente le cellule che producono muco per la presenza o l'assenza di segni di malignità.